实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问国际检验医学杂志

huarenqiang5

发邮件或打电话联系杂志社编辑部咨询一下。

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问Stem cells and development投稿

huarenqiang5

一般是在文章收到录用通知时就会有稿费缴纳通知。

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问糖基化修饰

loveliufudan

一种常用的方法是使用Western Blotting对样本中的GICNAC进行检测。可以用特异性抗体对GICNAC进行识别，并通过Western Blotting技术来检测抗体与GICNAC的结合情况。如果阳性组中GICNAC的含量确实显著降低，那么在Western Blotting图谱上，相应的GICNAC带应该会出现减弱或消失的信号。另外，还可以考虑使用其他的生化方法来对样本中的GICNAC进

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问裁膜的时候不小心把膜从中间撕开了类似这样请问有啥影响吗

橙汁儿青柠味

如果撕到目的蛋白区域，会导致蛋白条带开裂

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问求助 🆘想请教一下作奶粉蛋白质电泳的方法

loveliufudan

下面是奶粉蛋白质电泳的方法：材料：奶粉样品蛋白质电泳缓冲液β-巯基乙醇10%聚丙烯酰胺凝胶特定的电泳设备（如盒式电泳仪、垂直电泳仪等）分子量标准品步骤：将奶粉样品加入适量的蛋白质电泳缓冲液中，并在室温下彻底混合。在样品中加入少量的β-巯基乙醇，以还原样品中的二硫键，使蛋白质成为单独的亚基。将样品煮沸（通常需要5-10分钟），以进一步破坏二硫键并使蛋白质变性。准备聚丙烯酰胺凝胶。将凝胶混合物注入电泳

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问尿素处理包涵体蛋白

loveliufudan

对于包涵体中的蛋白质，通常需要用尿素进行处理以帮助其在电泳过程中展开成线性构象，从而更容易被分离和检测。下面是一般的尿素处理协议，供参考：材料：包涵体样品蛋白质电泳缓冲液（含有适量的尿素）1 M Tris-HCl pH 8.01 M DTT1 M IAA（碘乙酸）蒸馏水步骤：在室温下取出包涵体样品，加入足量的蛋白质电泳缓冲液，并混合均匀。将样品加入1 M DTT（终浓度一般为10 mM），使其还原

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问【WB求助】蛋白跑到一半下不来

loveliufudan

可能存在以下几个问题及对应的解决办法：1.蛋白质条带卡在某一个水平，无法继续迁移：这可能是由于电泳缓冲液的pH值过高或过低导致的。您可以尝试调整pH值到6.8-7.8之间，看看是否有所改善。此外，电泳温度过高也可能导致此问题，您可以降低电流或将电泳槽放在冰上进行电泳以降低温度。2.蛋白质条带分离不良：这可能是由于电泳缓冲液中离子浓度过高或者不均匀导致的。您可以尝试调整离子浓度或者尝试新鲜制备电泳缓

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问免疫荧光实验请教

loveliufudan

1.背景的干净程度可以通过观察荧光信号与噪声之间的对比度来评估。如果荧光信号明显且噪声水平低，则背景较为干净。2.为了避免非特异性干扰，可以通过以下技巧来调整荧光图像的放大比例和选择更好的视野：选择适当的曝光时间和增益来控制荧光强度和信噪比。对于多重染色样品，可以调整荧光通道的颜色合成，以便区分不同的标记。对于复杂样品，可以使用3D成像或多个视角的图像来避免非特异性干扰。3.如果抗荧光淬灭剂含有D

1 回答3025 围观

问检测血清异常值偏多，如何提高相关性

loveliufudan

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问求SCI发表流程

简简单单的8872

英文文章攥写，语言修改润色，目标杂志官方主页登陆，上传文章及相应数据，选择意向编辑，等待编辑审稿，一次审稿意见返回，稿件修改（可能会有二次修改），修改稿件上传，接收邮件，文章见刊。

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问巨噬细胞代谢和肿瘤

loveliufudan

确实存在一些矛盾，但这是因为M1和M2巨噬细胞在肿瘤微环境中的作用是非常复杂的，不能简单地用促炎和抗肿瘤来划分。以下是一些解释：M1型巨噬细胞可以通过释放炎性细胞因子（如IL-12、IL-23、TNF-α等）和自由基等，来杀伤肿瘤细胞和病原菌，从而发挥抗肿瘤和抗感染的作用。但是，乳酸是肿瘤微环境中的一种重要代谢产物，其浓度较高时可以抑制M1型巨噬细胞的活性，并促进巨噬细胞向M2型巨噬细胞的极化，从

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问细胞培养出现了许多细胞碎片该怎么办？如何避免？

橙汁儿青柠味

可以通过pbs多洗涤，消化离心去上清等从而去除细胞碎片，主要注意控制胰酶消化时间，防止过度吹打细胞

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问琼脂糖凝胶电泳

橙汁儿青柠味

主要是引物设计的不够特异，所以pcr出来很多非特异性的条带。可以在设计好引物后，在ncbi上面blast验证一下

4 回答640 围观

问qPCR内参Ct值

橙汁儿青柠味

模板cDNA稀释的比较多所以内参的ct值比较大，然后目的基因的表达丰度比较高，所以ct值比内参小

3 回答1600 围观

问求助，这种情况是不是污染了，如果污染这个是什么菌啊？怎么避免？

dxy_bz3louvw

可能是细胞消化的时候有一些没有吹散，导致细胞有几小团聚堆的，看图片感觉没有污染，如果长菌的话培养基会变混浊的，也可以自己判断一下。

5 回答557 围观

问求助小鼠皮下瘤长成分散瘤怎么办

loveliufudan

出现分散瘤的情况可能是由于注射的细胞或药物没有完全聚集在一起，导致瘤子在皮下生长时分散成了多个小瘤子。为了避免分散瘤出现，可以在注射前将细胞或药物均匀混合，并确保注射时将其聚集在一起。对于长有多个瘤子的情况，可以使用计算机辅助测量工具，如ImageJ等，对每个瘤子的长径和短径进行测量并计算平均值。也可以使用其他测量方法，如用卡尺和直尺测量瘤子的长径和短径。需要注意的是，测量时要避免压迫瘤子，以免影

2 回答643 围观

问免疫荧光很多蓝点，请问是什么原因呢？

橙汁儿青柠味

这可能是一些细胞碎片或者操作中可能混入一些杂质，多用pbs洗涤几次

5 回答888 围观

问敲降某甲基化转移酶以后，wb显示组蛋白H3K27me3和H3K4me3的水平不发生变化，请问是需要对细胞做什么处理再跑wb吗？

是TTT

你用的抗体是什么抗体呢，单甲基化抗体?

2 回答398 围观

问贴壁细胞mkn45消化用37度两分钟总是消化不下来，每次都要搞很久，细胞状态就不好了，该怎么办呢

是TTT

可以在显微镜下观察，细胞变成圆形，就可以加培基终止消化，并且吹打下来了，这种方法比较科学

5 回答461 围观

问用药物阻断H226细胞中的YAP - TEAD通路后，通过IP实验提取出YAP和TEAD蛋白

是TTT

药物阻断前呢，这两个蛋白分子量在不同的位置吗?如果胶的配方，电泳等都一致的话，这两个分子阻断前后分子量不一样，可能是药物对他们发生了修饰左右，例如糖基化等等，可能会影响分子量

3 回答359 围观

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