实验问答

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问ip后蛋白分子量变化了（和input不在同一水平线上）是什么原因呢？

土井挞克树

首先要排除你的IP条带不是IgG的重链和轻链，再者排除你的一抗或者二抗没有污染，一般我们用新配的抗体理论上说IP的条带要和Input的一样。

3 回答4944 围观

问请问跑出来IgG泳道有和IP组一样目的条带大小的条带，且不是轻链重链的大小处，是什么原因呢？背景也很干净，没有杂带

loveliufudan

如果在免疫共沉淀（Co-IP）实验中，使用的IgG抗体出现与目的蛋白一样大小的条带，可能存在以下几个原因：免疫共沉淀实验中IgG抗体的浓度过高：如果使用的IgG抗体的浓度过高，可能会导致其在样品中非特异性地结合，从而产生与目的蛋白一样大小的条带。共沉淀的非特异性蛋白质：在样品中可能存在一些非特异性的蛋白质，这些蛋白质可能会与IgG抗体非特异性地结合，从而产生与目的蛋白一样大小的条带。良性异克隆：有

3 回答2527 围观

问flag beads 拉出来的flag条带有严重的拖尾现象是为什么？怎么解决？

土井挞克树

拖尾考虑是有样品裂解的问题，建议用新鲜的样品，最好是现煮现跑，不要过夜

4 回答1807 围观

问我跑出来的Co-IP，为什么IgG有很浓的条带

土井挞克树

ig G条带很浓可能是抗体特异性差的原因，建议更换特异度高的抗体

3 回答3760 围观

问请问IP抗体与IF抗体有什么区别？想做IP实验，但是没有目的蛋白的IP抗体，查了所有的公司，只有IF或者wb抗体，那么可以用IF

土井挞克树

不可以互用的，IF是荧光实验的抗体，Ip实验一定要用IP抗体

3 回答1462 围观

问请问老师，在病理状态下有些蛋白的作用是低亲和力的或者是短时间的结合，请问如何提高低亲和力活着短时作用的蛋白呢？

土井挞克树

可以使用交联剂增加蛋白间的亲和力和结合力，保证互作的检测

3 回答222 围观

问蛋白丰度比较低，除了加大细胞投入量还有其他方法改进吗？

土井挞克树

蛋白丰度较低，可能是细胞裂解的不够充分，这时候需要更换裂解液，如果裂解充分建议还是增加细胞含量

3 回答450 围观

问瞬时互作蛋白怎么交联

土井挞克树

可以选择紫外线交联，或者化学交联法。蛋白质通过交联方法可以稳定或永久连接相互作用复合物中的成分，有助于鉴别这些瞬时接触。

3 回答520 围观

问交联剂的使用，是结合更容易和牢靠吗，感觉平时实验好像没用到

赛默飞世尔科技

交联剂主要是在相互作用较弱的蛋白互作检测中会用到，因为蛋白间相互作用较弱，很容易在样本制备过程中就破坏掉，所以这种情况下会推荐使用交联剂先固定住蛋白间的相互作用，以保证在后续CO-IP实验中被检测到。对于蛋白间相互作用比较强/稳定，在温和裂解液中不会破坏掉蛋白间的相互作用，这种情况就不需要用到交联剂。

3 回答369 围观

问我想请问coip蛋白破碎离心后，浮在上层的白色物质会不会影响蛋白与珠子结合，有什么办法可以避免吸到白色物质吗？

土井挞克树

可以用吸管缓慢多次吸取掉白色物质，或者加pbs稀释，更容易清除一些

3 回答842 围观

问免疫共沉淀-样品制备哪些步骤是可以灵活调整的，比如哪一步可以暂停一下？

土井挞克树

一般建议尽快裂解，负八十度保存不要超过三个月，时间太长会造成蛋白降解

3 回答517 围观

问裂解液成分中Triton x 100，NP-40，SDS，deoxycholate这几个哪些是CoIP比较适用的？为什么？细

土井挞克树

我一般会选择Triton x 100，因为coip通常不需要那么强的裂解作用，其他几种容易裂解过度

3 回答3910 围观

问有适用于植物的IP裂解液产品吗

土井挞克树

可以选择植物RIPA裂解液，裂解效果比较强

3 回答398 围观

问交联试剂盒里的细胞裂解液需要额外再加蛋白酶抑制剂么？

土井挞克树

一般是不需要的，裂解液中包含蛋白酶抑制剂，如果实验过程中蛋白降解太多，建议另外添加

3 回答1044 围观

问关于膜蛋白的Co-IP，有没有比较高效提取膜蛋白但是不破坏蛋白相互作用的裂解液呀

土井挞克树

这个可以考虑某些品牌新出的试剂盒，据说效果都不错，或者使用离心管柱法进行提取，能最大程度的保护蛋白性质不被破坏

3 回答1848 围观

问细胞裂解液用乙酰化抗体富集IP后，胶内酶解MS检测会不会丢失一些痕量修饰的蛋白

土井挞克树

又可能会少量丢失或降解，痕量修饰蛋白在酶解时可能有少量丢失

3 回答359 围观

问老师用动物组织标本做COIP与细胞做COIP有什么区别？您更推荐哪个？

土井挞克树

胞内蛋白做coip一般选用细胞标本，胞外蛋白一般选择组织标本/

3 回答1121 围观

问老师：做COIP实验的时候，是必须选择平时所用的某特异的细胞，还是用工具细胞也可以？

土井挞克树

最好是特异细胞，特异度高的细胞可以避免分选误差。

3 回答553 围观

问1.如遇组织标本，如何保证单细胞测序的细胞单一性？ 2.如何就获得的数据进行深度挖掘？ 3.如何平衡机体的个体差异与测序广泛性？

loveliufudan

1.针对组织标本进行单细胞测序时，保证细胞单一性的关键在于细胞的分离和捕获。通常采用酶消化、机械切割或磨碎等方法对组织样本进行分离和制备，然后通过流式细胞术、微流控芯片或微管阵列等技术将单个细胞捕获到反应管中进行测序。在这个过程中，需要注意以下几点：对组织样本进行消化或切割时，要尽量减少细胞的损伤和死亡，以避免影响单细胞测序的准确性。在捕获单个细胞时，要确保细胞的完整性和纯度，避免污染和杂交现象的

2 回答307 围观

问细胞油红O染色一定要做成爬片吗

huarenqiang5

不是必须要进行爬片，但是建议进行爬片，因为直接在板里染板的话可能会导致染的不均匀，而影响观察从而导致结果有误。

3 回答1821 围观

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