实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请教。我有一个目的片段大小在210，熔解曲线跑出的tm值达到了93，这个正常么，有人说温度越高，特异性越好，是这样么？

juyue2010

正常，这个与你扩增的目的条带gc含量有关

3 回答247 围观

问PCR扩增产物不是预期的条带，哪里出了问题？

juyue2010

可能设计引物时用的是cDNA，忽略了基因组上内含子

3 回答586 围观

问单细胞蛋白质组中应用单分子测序技术，但蛋白质有20种不同的氨基酸，加上翻译后修饰，繁杂的工作量，怎么明确进行区分？

土井挞克树

可以做空间组学区分，空间组学会根据序列和位置进行区分

2 回答307 围观

问ALP标记抗体方法步骤？

土井挞克树

流程：过碘酸钠氧化-乙二醇终止-加入抗体-碳酸盐透析-硼氢化钠还原-硫酸铵沉淀-溶解透析。

2 回答862 围观

问CTAB法提取RNA

土井挞克树

CTAB提RNA步骤：1.取1.5ml的离心管加入1ml预热的CTAB缓冲液(亚精胺)(65度),加20ul(β-巯基乙醇)。2.取材料研磨加入1.5ml的离心管中65度,10min(15min)加热,期间多次震动,摇匀。3.取上清至另一1.5ml加入等体积氯仿异戊醇(24:1)振荡摇匀,4度,12000rpm,10min离心,取上清至另一1.5ml的离心管中。4.重复一次。取上清至1.5ml的离

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问HepG2细胞出现小亮点，怀疑是白色念珠菌，但24小时培养基仍是澄清的，数量增加。高倍镜下观察没有动，且板里存在黑胶虫污染

sswei

培养基不浑浊，就有可能是细胞碎片，这种一般是细胞死亡裂解导致，原因有：1.营养或培养条件不行，细胞死亡；2.黑胶虫污染。

3 回答716 围观

问我跑出来的Co-IP，为什么IgG有很浓的条带

土井挞克树

igG条带很浓可能是样品被蛋白酶降解导致的，建议添加蛋白酶抑制剂,且所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。

3 回答10549 围观

问igg组拉不出诱饵蛋白但能拉出捕获蛋白是怎么回事呀  igg和ab组都能拉出来诱饵蛋白

loveliufudan

如果在 Co-IP 实验中，IgG 组无法拉出诱饵蛋白，但能拉出捕获蛋白，可能有以下几种可能的原因：抗体的特异性问题：IgG 组中的抗体可能不够特异性，容易发生非特异性结合，因此无法富集诱饵蛋白。可以尝试使用更特异性的抗体或优化抗体浓度。Co-IP 条件的优化问题：Co-IP 实验中的洗涤条件非常重要，如果洗涤条件不足以去除非特异性结合的蛋白，就可能影响诱饵蛋白的富集效率。可以尝试增加洗涤次数、延

3 回答480 围观

问请问26147试剂盒为什么洗不掉重链呀？频率还比较高

土井挞克树

重链洗不掉可能是交联作用太强了，可以加用裂解液增强洗脱

3 回答388 围观

问关于用只识别天然蛋白的二抗，去除轻重链。洗脱下来的IP抗体是变性的，为什么目标蛋白不是变性的？

土井挞克树

大概率是因为环境不同，如ph，温度的差异导致ip抗体变性。

3 回答541 围观

问裂解液如何选择？如何做泛素化的IP，条带怎么看

sswei

用于普通的Western、IP或co-IP，推荐使用Western及IP细胞裂解液，另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中

4 回答3061 围观

问黑胶虫污染，会影响动物造模实验吗

那兔那兔

黑胶虫污染会影响结果的准确性。

6 回答514 围观

问单细胞测序是否需要生物学重复？一般需要多少个才可以？

sswei

临床样本在开展单细胞实验时，每组样本能至少达到6-8例；非临床样本开展单细胞转录组测序，每组样本数能至少达到5-6例。

3 回答4212 围观

问细胞消化的过了影响后续的功能试验吗

那兔那兔

会影响，细胞消化过了会影响试验

7 回答1105 围观

问细胞污染，被支原体污染

是TTT

可以高压灭菌加热培箱此方法更加方便:75%酒精擦拭培箱里面，将板子拆卸放入细胞操作台紫外灭菌半小时再重新装入细胞培基里面添加支原体抗生素预防支原体污染

9 回答1085 围观

问WB只能跑出来内参没有目的条带求助

z流沙z

这种情况一般可能考虑抗体种属的问题，确认一下一抗二抗的种属正确

6 回答1234 围观

问HepG2细胞从边缘脱落，有什么可能的原因

是TTT

可能存在支原体污染，支原体污染是细胞培养过程中常见的污染。有两种方法可以检测:1.细胞培基里面添加一定量的支原体去除剂，观察细胞状态是否有所改善。2.有支原体检测试剂盒可以检测。

5 回答391 围观

问coip结果分析-救救孩子吧！！！

是TTT

这种结果没有意义60的位置可能是重链，110没有条带你需要排除以下原因:一.跑input排除蛋白没有降解。二.确认A抗体说明书可以用来做co-ip。三.co-ip全程需要冰上或者4℃。四.co-ip完成以后，蛋白洗脱步骤是否无误。五.co-ip实验除了需要有实验组，还应该设置对照组，对照组应为同种属的iGg抗体去拉

5 回答296 围观

问THP1细胞用PMA诱导分化成巨噬细胞后，还能继续增殖吗？

是TTT

理论上THP1细胞用PMA诱导分化成巨噬细胞后，增殖只是受到抑制，但是实际上基本不会再增殖。诱导前接种细胞细胞密度以1-2×10⒌为宜

8 回答2532 围观

问如何利用stata比较两组数据的相关性？

土井挞克树

2 回答1401 围观

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