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        DNA环化后连接液为什么要经过回收后再进行PCR反应

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        dxy_zwfkher7

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        7 个回答

        user-title

        是TTT

        有帮助

        因为环化率不是100%,所以需要将成功的环化DNA纯化出来,而且连接液中还有一些试剂残留需要除去

        user-title

        沫子大大

        有帮助

        可能会残留一些未被连接的接头,缓冲液和酶等物质。这些会影响pcr产物质量和数量。

        user-title

        dxy_xextz7w2

        有帮助

        DNA环化过程中可能会出现除了目的片段连接之外的其他组合链接方式,比如DNA自连或者没有链接成功,都会有条带在里面,回收过后会使目的条带更纯

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        环化反应中的成分会影响PCR反应效率

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        因为环化后的连接液成分有杂质污染,所以不能直接用于pcr

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        在进行DNA环化后连接液的回收后再进行PCR反应的主要原因是为了提高PCR反应的效率和特异性。

        在DNA环化后连接液的反应中,连接液中可能存在未反应的连接试剂、外源DNA片段、DNA连接酶等杂质物。如果直接将整个连接反应产物直接用于PCR反应,这些杂质物可能会干扰PCR反应,影响PCR的准确性和特异性。此外,连接液中的一些试剂也可能对PCR反应起到抑制作用。

        通过回收DNA环化后连接液,可以将目标DNA片段有效地提取出来,并去除大部分的杂质物。这样可以减少PCR反应中可能存在的抑制物质,并提高PCR反应的效率和特异性。此外,回收连接液还可以节约实验成本,减少实验的浪费。

        回收DNA环化后连接液的具体步骤可以包括离心沉淀、废液去除、洗涤和溶解等操作。回收后的DNA连接产物可以直接用于后续的PCR反应,提高PCR的成功率和结果的可靠性。

        需要注意的是,在回收连接液之前,要确保连接反应已经充分进行,并验证连接反应的成功。此外,回收过程中要注意避免污染和样品交叉污染,以保证PCR反应的准确性和可靠性。

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        天一湖医者

        有帮助

        因为经过PCR扩建的基因片段也是要进行凝胶电泳并回收的。因为PCR的产物除了你要的基因片段之外,还有模板、primer、错配片段等不需要的基因片段,进行凝胶电泳可以将它们进行初步分离,之后回收你的PCR产物才能进行后续的分子实验。

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