实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问PCR产物跑胶，产物堵在了孔里是怎么回事呀所有的情况都试过了，还是堵在孔里.?

sswei

可能是因为DNA产物与酶进行结合了,导致堵在胶孔里跑不下来,可以加一点SDS然后再跑胶图,就可以分开了,就不会堵在胶孔里了。

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问PCR产物后电泳孔里有很亮的条带是什么原因

loveliufudan

当在PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳后，在孔口处出现很亮的条带，可能是由于以下原因之一： 1. 异源污染：很亮的条带可能是由于PCR反应体系中的异源DNA污染引起的。这可能来自其他PCR产物、外源DNA、引物、试剂或实验室环境中的DNA。在PCR实验中，特别是在DNA扩增前和反应制备中，严格的无菌操作至关重要，以减少异源污染的可能性。 2. 异常扩增产物：很亮的条带可能是由于非特异性扩增或其他PCR异

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问请大家帮我看看是不是污染了？如图，raw264.7细胞，小点貌似是贴壁，如何处理？谢谢！

sswei

可能是细胞碎片，继续培养观察。

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问想问提纯大蒜素如何给小鼠灌胃

loveliufudan

大蒜素（Allicin）是一种疏水性物质，因此它并不容易在极性溶剂如水或生理盐水中溶解。然而，大蒜素在非极性或半极性溶剂中（如酒精，二甲苏等）能较好的溶解。对于动物实验中的灌胃操作，可以考虑以下几种方法：1. 使用溶剂：例如用少量的酒精或DMSO等非极性溶剂将大蒜素溶解，然后将其稀释到适当浓度。请注意，这种方法需要注意溶剂的使用量，以避免对动物产生潜在的毒性影响。2. 使用悬浮液：大蒜素可以在某些

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问请问为什么临床预测模型做出来的概率只有0.6，如图，AUC是0.84

loveliufudan

预测模型输出的概率值和AUC（Area Under the Curve）是两个不同的概念。1. 预测概率：模型对于某一观察结果属于某一类别（如疾病存在或不存在）的预测可能性。在你的例子中，模型给出的0.6的概率可能是预测某一疾病存在的可能性。这个概率是相对的，通常会设置一个阈值来判断结果（如概率大于0.5就认为疾病存在）。但这个阈值并非固定的，可以根据实际的需求和情况进行调整。2. AUC：AUC

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问扩5000多的片段，分两段扩增的，总是有突变怎么办？

loveliufudan

PCR扩增过程中产生突变可能由多个因素引起，这里有一些可能的解决方案： 1. 使用高保真聚合酶：你已经使用了高保真聚合酶，这是非常好的，因为它们比常规的聚合酶有更低的突变率。你可以尝试更换不同品牌的高保真酶，看看是否有改善。 2. 优化扩增条件：过高的扩增温度或过多的扩增循环数可能会导致DNA损伤和突变。你可以尝试优化扩增条件，例如降低扩增循环数，减少模板DNA的量。 3. 检查模板DNA质量：模

3 回答2417 围观

问wb检测细菌提取的蛋白，成像时maker显色了，可能哪里出问题了呢？

sswei

绝大多是因为和2抗交叉反应导致形成的。

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问请问流式检测细胞凋亡，统计分析是算的早期凋亡还是总的凋亡率？

loveliufudan

流式细胞仪常用来检测细胞凋亡，其中常用的方法是Annexin V和PI（丙啶碘）双染色。根据细胞凋亡的早晚阶段，细胞可以被分为三类：1. 正常活细胞：Annexin V阴性，PI阴性2. 早期凋亡细胞：Annexin V阳性，PI阴性3. 晚期凋亡细胞或坏死细胞：Annexin V阳性，PI阳性因此，当你在做统计分析的时候，你可以选择计算早期凋亡率（仅计算Annexin V阳性，PI阴性的细胞比例

4 回答1577 围观

问求助大佬们，请教一下我养的这个细胞是hepg2细胞吗？

sswei

hepg2细胞是一种肝癌细胞，具有以下形态特征：细胞呈椭圆形或不规则形，直径在10-20微米之间。因刚复苏，镜下看可能是hepg2细胞。

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问BMDc养细胞堆在一起怎么考虑？

10for7

可以尝试换一下血清试一下，之前养其他细胞也出现这种情况，换一种血清后改善

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问做qpcr时用到的八联管需要高压灭菌吗？

dxyc42u

不需要啊，只要无酶就行，再说了八连管买回来就是无菌无酶的啊

4 回答2050 围观

问求助小鼠卵母细胞的荧光实验

dxyc42u

吸完细胞吹的时候慢一些细胞基本都能吹出来，这样细胞损失的就会少很多

4 回答647 围观

问如何学习孟德尔随机化

dxyc42u

可以先从机器学习开始，一边看教程一边学习

2 回答1718 围观

问自变量为二分类变量可以绘制ROC曲线吗

dxyc42u

自变量为二分类变量做出来的ROC曲线可以具有意义3.二分类变量可以和连续型变量或者其他分类变量联合起来做联合诊断的ROC曲线

3 回答3064 围观

问混合效应线性模型的β能纳入Meta 吗

sswei

如果两个模型的研究对象和设计有差异，不可以进行合并。

3 回答455 围观

问meta分析

dxy_akqp9v7

多检索几个数据库：EE+，dynamed，Ovid，uptodate……都试试，实在没有，就重新从别的角度考虑主题。

3 回答415 围观

问蛋白纯化

土井挞克树

可能是形成聚合体了，所以跑出来的蛋白比较大

3 回答601 围观

问cGMP

sswei

环磷酸鸟苷(CGMP)是环核苷酸中最具生物活性的成分之一，与信号转导有关，由鸟苷酸环化酶催化GTP而生成。可用于WB，PCR等检测。

3 回答450 围观

问求助|鼠尾鉴定出现非特异条带怎么办？

balalaLy

如果购买的敲除鼠，那你的引物以及pcr程序都是公司鉴定过给到你的。那么出问题的大概率应该就是pcr试剂或者引物保存问题。

4 回答1284 围观

问在做三系诱导分化实验，bmscs诱导过程中容易漂浮和卷边，包被了也不行，怎么办

dxyc42u

有可能是诱导时间过长的原因导致的

3 回答548 围观

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