实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问LPS诱导细胞炎症模型，必须是细胞培养级的LPS吗？

土井挞克树

最好是细胞培养级lps，级别不够容易导致诱导失败，不建议用

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问安徽医药审稿快，目前统计三审，有投的小伙伴吗？帮我看一下有戏吗？

sswei

己经三审了，马上就快定稿录用了，耐心等佳音。

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问怎样知道PCR反转录试剂盒的开始投入使用年限

loveliufudan

要确定PCR反转录试剂盒的使用年限，最好参考制造商提供的说明书或技术手册。在这些文档中，制造商通常会提供关于反转录试剂盒的储存条件、有效期限以及建议的使用年限等信息。

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问discovery studio

loveliufudan

在Discovery Studio 19版本中，可以使用相应的工具和模块来模拟不同温度下的分子对接。该软件包含了一系列的计算工具和模拟方法，其中一些方法可以考虑温度的影响。具体来说，Discovery Studio中的Ligand-Protein Interaction模块（LPI）和其他分子对接工具（如CDOCKER、ZDOCK等）通常允许用户设置模拟参数，包括温度。通过调整温度参数，你可以模拟

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问蛋白组学数据分析

loveliufudan

蛋白组学数据的分析通常涉及多个步骤和方法。以下是一般的蛋白组学数据分析流程的一些常见步骤： 1. 数据预处理：包括数据清洗、峰识别、背景校正等。这些步骤有助于减少噪声和非特异性信号，提高数据质量。 2. 蛋白鉴定和定量：通过比对实验数据和数据库（如UniProt）中的蛋白质序列信息，确定鉴定出的蛋白质。常见的鉴定方法包括谱库搜索、数据库搜索、比对引擎等。定量方法可以使用标记的（如TMT、iTRAQ

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问为什么ppic9k转入GS115的时候，要用通用引物来验证呢，用目的基因的特异性引物

loveliufudan

在将pPIC9K质粒转入GS115酵母细胞中，通常使用通用引物进行验证的原因是确保质粒成功转入细胞，并且在细胞中进行了稳定复制。这种验证方法可以确认质粒的整合和存在，而不依赖于特定目的基因的引物。使用目的基因的特异性引物进行验证是更直接和具体的方法，可以验证目的基因是否被成功表达。这种方法可以提供关于目的基因表达的信息，但并不提供关于质粒整合和存在的信息。因此，在pPIC9K转入GS115酵母细胞

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问提取烟草叶片RNA拖带是为什么

loveliufudan

烟草叶片RNA提取中出现拖带和胶图弥散的问题可能有几个可能的原因： 1. RNA降解：RNA在提取和处理过程中容易受到核酸酶的降解。如果样品处理不当、时间过长或者未能避免核酸酶的存在，可能导致RNA的降解，从而出现拖带和胶图弥散的现象。 2. 污染物：可能存在其他核酸、蛋白质或化学物质的污染，这些污染物可能影响RNA在凝胶电泳中的迁移，导致拖带和胶图弥散。在提取RNA的过程中，注意使用无RNase

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问同一样本Pcr第一天测阳性，第二天又测不出

loveliufudan

这种情况可能有以下几个原因： 1. 恙虫感染的动态：恙虫病病毒在感染过程中的病毒载量可能会波动，特别是在早期感染时。因此，即使在不同时间点进行检测，病毒的存在和载量可能会有所不同，导致结果的差异。 2. 样本质量差异：样本的质量可能会影响PCR结果。可能存在一些样本中的抑制物质（如血液残留、纯化剂等），可能干扰PCR反应的进行。因此，即使使用新的试剂和水，质量差异仍然可能导致结果的差异。 3. P

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问代谢通路

loveliufudan

在这个表格中，Hits数显示了在不同的代谢途径中与差异脂质物种相关的匹配数量。它可以用来衡量差异代谢物在特定代谢途径中的富集程度或相关性。其他相关的列信息解释如下： • Pathway Name: 代谢途径名称，指示特定的代谢途径。 • Impact: 代谢途径的影响值，它是通过代谢途径拓扑分析计算得出的。 • Raw p: 通过富集分析计算得出的原始p值。 • FDR: 使用虚假发现率（Fals

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问铁死亡Erastin为啥增加Fe2➕？不是调控XC-吗？

loveliufudan

Erastin是一种广泛研究的抗肿瘤化合物，它被认为是通过调控细胞中的胞内GSH（谷胱甘肽）水平来诱导铁死亡（ferroptosis）。Erastin作用的机制涉及对胞内胞质蛋白复合物XC-的调节，该复合物在细胞中媒介着胞内谷胱甘肽（GSH）的合成和细胞外环氧脂酸载体（SLC7A11）的导出。通过抑制XC-的功能，Erastin可以降低胞内GSH水平，进而引发铁离子的积累和细胞内的氧化应激，最终导

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问细胞克隆形成拍照

sswei

细胞培养板不建议重复使用以免引起交叉污染，损害细胞状态。

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问RAW264.7复苏后肉眼可见死细胞团是怎么回事？

loveliufudan

可能存在以下几种情况： 1. 细胞凝聚：RAW264.7细胞具有细胞凝聚的倾向，特别是在复苏过程中。当细胞凝聚在一起时，可能形成肉眼可见的细胞团。这并不意味着所有的细胞团都是死细胞，因为一些细胞可能仍然具有存活状态。 2. 细胞凋亡：细胞复苏的过程中，有可能存在一部分细胞发生凋亡。细胞凋亡是一种程序性细胞死亡形式，通常伴随着细胞体积的减小和细胞碎片的形成。这些凋亡细胞可能在复苏后形成肉眼可见的死细

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问请问我刚刚复苏的THP-1为什么很多贴壁的

loveliufudan

可能存在以下几种情况： 1. 细胞分化：THP-1细胞在一定条件下可以通过诱导分化为粒细胞样巨噬细胞。这种分化状态下的THP-1细胞会附着在培养底物上。如果你的复苏条件导致了THP-1细胞的分化，那么贴壁的现象就是正常的。 2. 细胞应激：复苏过程可能会对细胞产生一定的应激。细胞应激可以引起细胞形态和行为的改变，包括附着能力的增强。这可能是导致复苏后THP-1细胞贴壁的原因之一。如果你希望保持TH

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问重组蛋白和抗体的区别

loveliufudan

重组蛋白和抗体都可以作用于细胞，但它们的作用机制和途径略有不同。重组蛋白（例如细胞因子、生长因子等）可以通过与细胞表面的受体结合，触发细胞内信号传导途径，从而影响细胞的功能和行为。这些重组蛋白通常以溶液形式添加到细胞培养基中，与细胞表面受体发生特异性的相互作用，导致细胞内信号转导的激活，从而影响细胞的增殖、分化、存活等生物学过程。抗体则可以通过其结构中的抗原结合部位与特定的抗原结合。当抗体与其特异

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问双荧光素酶top/fop实验，萤火虫值低

loveliufudan

双荧光素酶top/fop实验是用来评估转录因子活性的常见实验方法。根据你的描述，如果在质粒比例的不同条件下，使用相同的细胞系和相同的转染时间，萤火虫荧光值都维持在10^4左右，而海参荧光值在10^6或10^8左右，可能有几个可能的原因： 1. 表达系统问题：萤火虫荧光素（Luciferase）和海参荧光素（Renilla Luciferase）具有不同的性质和表达效率。可能存在一些细胞因子或转录因

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问蛋白质的理化性质

loveliufudan

堂试剂的凝胶法用于测定内毒素含量，主要是利用了蛋白质的的理化性质中的凝胶特性。蛋白质凝胶是指在适当条件下，蛋白质分子能够聚集形成三维网络结构，从而形成凝胶。凝胶的形成通常是通过蛋白质分子之间的相互作用力来实现的，例如氢键、疏水相互作用等。凝固酶是一类酶，能够促使蛋白质分子聚集并形成凝胶。具体而言，凝固酶能够作用于特定的蛋白质分子，使其发生聚集和凝固，从而形成凝胶状态。凝固酶的作用可以通过破坏蛋白质

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问乳酸菌耐酸耐胆盐

loveliufudan

在进行乳酸菌耐胆盐实验时，如果你的对照样品（即未添加胆盐的样品）的OD值非常低，可能有以下几个可能原因： 1. 菌液浓度太低：如果对照样品的菌液浓度较低，它的光吸收能力也会相应较低，导致测量的OD值较低。确保你的对照样品与其他实验样品的菌液浓度相近，以便比较它们之间的差异。 2. 菌液悬浮不均匀：如果菌液在添加胆盐后变得浑浊不清亮，可能是因为菌液出现了悬浮不均匀的情况，导致光线无法均匀穿透，从而影

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问大家可以帮忙看一下这是什么吗感谢

sswei

镜下看细胞生长密度过高，细胞凋亡，易致细胞死亡。

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问chip磁珠法

loveliufudan

在CHIP（Chromatin Immunoprecipitation）磁珠法后续进行SEA（Sequential Enrichment Analysis）时，可以尝试使用磁力架来实现磁珠的分离和洗涤步骤。磁力架是专门设计用于与磁珠结合并在磁场中进行分离的设备，能够方便快捷地收集和清除磁珠，减少操作时间和液体处理步骤。如果没有磁力架，理论上可以尝试使用磁铁来替代。然而，需要注意以下几点： 1. 磁

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问coip细胞裂解液求助

loveliufudan

进行膜蛋白的共免疫沉淀（Co-IP）实验时，选择合适的裂解液配方是非常重要的。裂解液的成分应该能够充分裂解细胞膜，并保持目标蛋白质的稳定性和功能。以下是一种常用的裂解液配方，供参考： 1. 缓冲液：选择适当的缓冲液，如磷酸盐缓冲液（PBS）或甘氨酸盐缓冲液（Tris-Glycine），pH值根据实验需求选择合适的范围。 2. 蛋白酶抑制剂：添加蛋白酶抑制剂，如苯甲砜（PMSF）、氨基甲酸甲酯（AM

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