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        wb转膜之后老是很斑驳

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        Garmon

        wb转膜之后条带很斑驳,换了转膜液,换了PVDF膜,换了机器,换过滤纸和海绵垫,情况时而轻时而重,不知道啥原因,以前都不会,最近几个月老是这样,不知道有没有大神指导一下,谢谢,横流200ma转膜110分钟,可能是温度高导致的吗?图片描述图片描述

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        3 个回答

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        应该温度高了,有冷库的话放在里面跑

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一些可能的原因和解决方法:

        1. 转膜条件:你提到使用了200mA电流和110分钟的转膜条件。高温可能会导致电解液的快速蒸发和不均匀转膜,进而影响蛋白质的迁移。你可以尝试降低转膜条件,如减小电流或缩短转膜时间,以降低温度和增加转膜的均匀性。

        2. 蛋白质样品:不同的蛋白质样品可能对转膜条件更为敏感。尝试调整电泳条件,如减少样品量、优化电泳缓冲液配方和pH,以及增加染色剂浓度等,可能有助于改善转膜结果。

        3. 转膜装置:你提到已经更换了转膜装置,但问题仍然存在。确保转膜装置的组装和使用按照正确的方法进行,并检查是否存在任何漏电、接触不良或装置损坏等问题。

        4. 转膜膜和滤纸:你提到已更换了PVDF膜和过滤纸。请确保所使用的转膜膜和滤纸是高质量的,并按照制造商的建议进行使用。

        5. 缓冲液和电解液:缓冲液和电解液的配制也可能对转膜结果产生影响。确保准确配制缓冲液和电解液,并按照推荐的使用条件进行操作。

        6. 检查其他实验步骤:除了转膜步骤外,还应仔细检查其他实验步骤,如电泳条件、蛋白质提取、样品制备和染色等。确保这些步骤都按照标准方法进行,并排除其他可能的误差来源。


        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        把电压适当提高一下,然后保持温度不要太高进行转膜

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