实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问为什么做cck8实验高浓度药物处理细胞全都死了，但是OD值却还是很高？

于小鱼鱼1998

如果有细菌污染的话od值是会增高的，需要排除污染原因

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问WB内参可比性疑惑，如何确保可比性

土井挞克树

看wb的条带形状，条带的粗细可以反映上样量差异，不一致的时候需要对细条带进行调整

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问请教大家：大鼠注射的过表达腺相关病毒是含红色荧光的，检测注射部位后，后期需要检测目标蛋白的免疫荧光是否需要避开红色光选择呢？

于小鱼鱼1998

如果病毒含红色荧光，后续目标蛋白检测要避开红色，否则容易混淆，无法得出特定结论，也可以进行自发荧光消除

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问实验小白一个，GST pull down应该如何下手？是否有专门的GST标签载体？载体如何构建？

loveliufudan

进行GST pull-down实验时，你可以按照以下步骤进行：1. 购买GST标签载体：GST标签通常与质粒载体一起购买。GST标签质粒是经过改造的质粒，其中包含GST基因序列，允许将GST蛋白与目标蛋白相互结合。2. 构建GST融合蛋白表达质粒：将你感兴趣的目标蛋白的编码序列与GST基因序列连接起来，构建GST融合蛋白表达质粒。这可以通过标准的分子生物学技术，如PCR扩增、限制酶切和连接，或使用

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问有人知道有哪些温度敏感型复制子原件吗？

loveliufudan

在温度敏感型复制子原件领域，存在一些已知的温度敏感复制子原件，其中一些常见的包括： 1. oriR6Kγ（oriR6K-gam）：这是一种广泛应用于分子生物学实验中的温度敏感复制子原件。在低温（通常为30℃）下活性较低，但在高温（通常为42℃）下能够较高效地复制。 2. pSC101：这是另一个常用的温度敏感复制子原件，也常用于分子生物学实验。在低温（通常为30℃）下具有较高的复制效率，但在高温（

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问有人知道载体上plCori这个原件作用吗？

loveliufudan

pICori是一种用于大肠杆菌（E. coli）的复制子原件，被用作质粒载体上的起始复制点。该复制子原件可以在细菌中实现高效的复制，并在细胞分裂时保持质粒的稳定性。pICori的作用类似于其他一般的质粒复制子原件，它提供了必要的序列和元件，使得质粒能够自主地复制并在细菌中维持稳定。具体来说，pICori包含了起始复制点和复制所需的其他序列，这些序列通常与DNA复制酶、启动子和终止子等相关。通过与宿

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问同源重组基因敲除糖筛多次均以失败告终

loveliufudan

以下是一些可能的原因和建议： 1. 检查实验条件：确保使用的蔗糖浓度和培养条件是正确的，因为这些条件对于成功的筛选很关键。确认实验步骤是否准确无误，并且实验室设备正常运行。 2. 自杀质粒的稳定性：检查自杀质粒的构建是否正确，并确保质粒在菌株中的稳定性。可能需要进行额外的验证或优化质粒构建步骤，以确保其稳定性和可靠性。 3. 检查目标序列：确认你的目标序列是否与自杀质粒匹配，并且没有发生不可预料的

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问KGN细胞造卵巢早衰模型，应该用什么溶剂溶解CTX呢

huarenqiang5

一般是应用PBS来溶解CTX。

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问饥饿和消化的步骤可以反一下吗？就是我先消化铺在transwell小室里饥饿后再在下室里加血清

loveliufudan

当涉及到饥饿和消化的步骤时，常见的顺序是先进行消化，然后进行饥饿。这是因为在实验室或研究中，通常会先将样本或细胞置于含有适当培养基或培养液的环境中，使其有足够的养分进行生长和繁殖。然后，如果需要，可以对其进行饥饿处理，以模拟特定的条件或研究饥饿对细胞或生物体的影响。所以，一般情况下，先进行消化，然后再进行饥饿处理。您可以先将样本放置在Transwell小室中进行消化，然后将其移至下室并加入血清进行

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问天然蛋白做乳化剂，可以促进肠道淋巴吸收吗

huarenqiang5

天然蛋白做乳化剂能够促进肠道淋巴的吸收。

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问SD幼年鼠药物用量是成年鼠的多少倍？

feixue7758527w

我觉得你应该再看看文献，如果文献上没有的话，就只能按大鼠的一半的剂量慢慢摸索了。

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问想了解大鼠股骨组织的破骨细胞是选用TRAP染色、TRAP免疫组化、TRAP免疫荧光的那种效果更好？

huarenqiang5

了解大鼠股骨组织的破骨细胞一般选用TRAP染色，纯度可达30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

3 回答950 围观

问求问如何利用CTX在KGN细胞内造早衰模型

于小鱼鱼1998

ctx需要配置为环磷酰酸之后才能用于早衰造模，可以用pbs溶解

3 回答436 围观

问难题：大鼠幼崽的给药换算

dxyc42u

对于大小鼠还应换算成大鼠ml/100g体重和小鼠ml/10g体重，其中大鼠一般用0.2ml/10g体重，小鼠一般用0.1ml/10g体重。

3 回答1243 围观

问大佬们，请问受精卵转染需要哪种试剂盒

晓雨知春来

你可以试试用磷酸钙受精试剂盒。

3 回答403 围观

问原代嗅鞘细胞提取时消化久了会怎样

sswei

消化时间过长，对细胞会造成损伤，影响其活力，甚至细胞破碎

3 回答357 围观

问动物实验的脂质溶剂问题

土井挞克树

可以使用dmso溶解，或者选用脂肪乳进行溶解

3 回答588 围观

问Msc干细胞培养两天还是接种状态

dxyc42u

刚复苏的细胞恢复就是有点慢，再等两天看看

4 回答339 围观

问关于多转录本引物设计的进一步问题

dxyc42u

细胞样本提取的rna是成熟rna，经过逆转录后的cdna不包含内含子序列，设计引物时要考虑内含子外显子的问题，不然怕扩增不出来

4 回答969 围观

问长期口臭，检查幽门螺旋杆菌为阴性，有可能是什么导致口臭？

RYX艳艳

可能是消化不好胃肠道问题，积食引起或者于口腔问题和牙周疾病有关

5 回答523 围观

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