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        伊文思蓝定量

        相关实验:乙醇发酵实验

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        伊文思蓝定量怎么做呢?用三氯乙酸提取的话,要用无水乙醇吗?加无水乙醇的作用是什么?是稀释吗?浓度根据标曲算出来怎么把单位转换成微克/克?求一个具体的流程。感谢!!!

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        伊文思蓝(Evans Blue)是一种用于血管渗漏和组织渗透性研究的染料。以下是一个基本的伊文思蓝定量测定的流程:

        1. 样品制备:

        • 收集需要测定的样品,如血液或组织样本。

        • 如果使用三氯乙酸提取,将样品与三氯乙酸按照适当的比例混合,并离心以沉淀蛋白质。

        2. 伊文思蓝染色:

        • 取适量的伊文思蓝溶液(一般为0.5%-2%浓度)。

        • 将样品与伊文思蓝溶液按照适当的比例混合,使伊文思蓝充分与样品中的蛋白质结合。

        • 在适当的温度和时间下进行反应,通常是在37摄氏度下孵育1-2小时。

        3. 染色液去除:

        • 将样品与伊文思蓝染色液分离,一般通过离心分离。

        4. 染色物定量:

        • 用适当的溶剂提取染色物。

        • 使用分光光度计测量提取物的吸光度。

        • 使用标准曲线或浓度计算公式将吸光度转换为伊文思蓝的浓度。

        关于使用无水乙醇,它在这个过程中的作用是将伊文思蓝溶解并稀释。无水乙醇可以有效溶解伊文思蓝,使其在溶液中均匀分散。此外,无水乙醇还可以稀释样品中的蛋白质和其他干扰物质,从而更准确地测量伊文思蓝的吸光度。

        最后,将浓度从吸光度单位(一般为吸光度单位)转换为微克/克的单位需要知道样品的体积和浓度。通过浓度计算公式,将伊文思蓝的浓度(以吸光度表示)除以样品的体积,然后乘以适当的单位转换系数,将单位转换为微克/克。


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        土井挞克树

        有帮助

        伊文思蓝染色步骤:

        1. 取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内,入100μl Evans Blue Stain轻轻混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但不宜超过10min)。

        2. 吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数500个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。

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        于小鱼鱼1998

        有帮助

        伊文思蓝具体操作步骤

        1.组织置于1.5ml离心管中,加入1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将组织制成匀浆,1000g离心15min。


        3. 取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室温孵育24h。


        4. 1000g离心20~30 min或2000g离心15min。


        5. 取上述溶液1~2ml,用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的伊文思蓝含量。

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