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        Elution buffer预热到75度会使<10kb的质粒降解吗

        相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

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        Marrow拙云

        提质粒最后一步不小心把elution buffer加热到了75度,但质粒其实不超过10kb,最后提出来的质粒测双链DNA浓度都只有100左右,还有一个低到80ng/ul。是不是由于这个加热导致的,这个质粒还能用吗?请大神们赐教

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        4 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        如果只有少量降解还是可以使用的,太多分裂片段就不可以了。

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        申东熙老伯

        有帮助

        想知道质粒还能不能用可以跑个胶看一下,条带正常就可以用,测浓度的时候观察一下260/280的值,看在不在正常范围。

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        huarenqiang5

        有帮助

        你这个情况是加热导致的,这个质粒最好不用了,建议重新做。

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        loveliufudan

        有帮助

        根据您的描述,提取质粒时将洗脱缓冲液加热到75℃可能会对质粒产生一定的损伤,导致DNA纯度降低,甚至部分质粒分解。同时,您提到质粒大小不超过10kb,这也可能导致质粒的提取量较低。

        由于您提到测量双链DNA浓度的方法,我们可以猜测您可能使用的是分光光度法。在这种情况下,如果DNA样品中存在杂质或DNA受到损伤,会导致A260/A280比值下降,从而表明DNA纯度降低。

        因此,建议您使用其他质粒提取方法或者优化您当前的提取方案,以提高质粒纯度和收率。同时,您也可以尝试使用其他测量DNA浓度的方法,例如琼脂糖凝胶电泳或荧光法,以获得更准确的结果。最后,请注意在质粒提取过程中保持操作规范,避免对样品造成损伤。

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