• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        转化

        相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

        最新修订时间:

        原理

        转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法,CaCl2)处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Competentcells)。进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(Transformant),即带有异源DNA分子的受体细胞)。

        材料与仪器

        步骤

        1.  100 ul感受态细胞在冰中融化。
         
        2.  分装2管,50 ul/管。
         
        3.  加入转化的DNA Xul。
         
        4.  冰中放置30 min。
         
        5.  42 ℃放置90 sec。
         
        6.  冰中放置2~3 min。
         
        7.  加入4倍体积的SOC液体培养基或LB液体培养基。
         
        8.  37 ℃振荡培养1 hrs。
         
        9.  涂平板,37 ℃温箱培养12~16 hrs。

        注意事项

        1.  加入DNA的量要小于10 ng,DNA的量过高影响转化效率。
         
        2.  SOC培养基可以用LB培养基替代,但是转化率低于使用SOC培养基。
         
        3.  热激温度42 ℃一定要准确,否则影响转化效率。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序