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原核蛋白纯化,上清跑胶有带,纯化后没带是什么原因
yangyang214
检测结合后的上清,以及beads,看是没结合上还是没洗脱下来。
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问
请问大家配好的培养基在4℃最多能放多久?如果在60℃水浴了一下午,培养基还能用吗?
未来9
密封灭菌后放置在2-8℃冰箱内可以保存三个月,普通的培养基平板可以保存一个月或更久。60℃水浴了一下午,培养基还可以用的。
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问
细胞培养基里出现小黑点,但是溶液没有变浑浊,怎么去除呢?
Eason老歌迷
可以做一下支原体检测,如果排除了支原体污染,可以看看是不是细胞老化,或者黑胶虫污染
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问
为什么要热灭活血清?
bamboopiggy
灭活其中的补体,一般养免疫细胞要热灭火血清
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问
L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
Eason老歌迷
肯定重要,它不仅可以提供能量,而且蛋白质的合成和核酸代谢的也有它的参与。至于说它稳不稳定,其实它并不是一种稳定的氨基酸,在中性水溶液中会自发降解,4℃冰箱内放置2周,大部分谷氨酰胺就没了。
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问
细胞解冻的相关问题?
ZPODY
推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养
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问
关于细胞培养消化时间问题?
dxy_elk098he
消化中途可以多拿几次出来镜下观察状态,有大部分飘起来了就可以通过晃动摇下来剩下的。
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问
贴壁细胞传代相关问题?
bamboopiggy
建议把细胞传稀点,然后只换液,不传代,看细胞状况是否有改善
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问
原代平滑肌细胞很难穿过transwell小孔的原因
Eason老歌迷
是不是培养时间过短,记一下时,然后看看延长时间后的效果
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问
细胞冻存使用培养液可不可以
Guoood
用10%DMSO的全培冻存细胞就可以了,如果细胞比较珍贵也可以用纯血清冻存,而且还可以考虑用商品化的冻存液也有不错的效果。全程保持无菌操作,不需要加抗生素。
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问
细胞冻存放置于负80度冰箱一般能够保存多久?
未来9
肿瘤细胞一般在添加冻存液保存的情况下可以在-80度保存3个月内存活率一般可在80%以上,6个月以上大部分肿瘤细胞的存活率就会降低很快,即使复苏出来细胞是活着的,但是活性也会很低,对细胞状态影响很大。如果需要长期保存,最好是储存于液氮中,
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问
请问原代小胶质细胞的提取是只能从乳鼠的大脑提取嘛?成年鼠的大脑可以吗,还是成年鼠的脊髓?
Eason老歌迷
一般是从乳鼠的大脑皮层提取。当然可以从成年鼠的大脑中提取,你一查文献就能看到,介绍了很多种方法,比如说Calvo, Belen在IBRO Rep 2020 Jun对解离方法和基于Percoll的分离进行比较过分析。
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问
细胞培养碰上支原体污染该怎么办
此用户已注销
支原体污染细胞后,有必要清除支原体,常用方法有:1)对于非重要的细胞,如培养中的细胞、WCB的细胞等,将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。对于较为重要的细胞,如来源珍贵或实验室中细胞保藏量较小等可以采用以下(2)-(8)的方法。2)用MRA处理:用支原体清除剂处理细胞,作用浓度为 25μg/ml,两周可以清除支原体。3)用清洗纯化法清除支原体污染的方法:细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清
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问
猪肺原代巨噬细胞适合什么培养基,1640还是高糖
bamboopiggy
巨噬细胞一般算悬浮细胞,适合用1640养
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问
细胞增殖检测方法的选择?
一个小哭包
总结来说,MTT法和CCk-8法适用于所有细胞。但如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高,从经济角度可以选择MTT法。如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高,并且希望非常便捷,在研究经费许可的条件下,建议选择使用CCK-8法。
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问
DMSO对冻存细胞复苏的影响?
whilt-shirt
需要立即去除DMSO,低温时DMSO对细胞有保护作用,常温下DMSO对细胞就有毒性了
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问
关于肿瘤细胞悬浮培养?
一个小哭包
主要是,正常细胞和癌细胞相比有接触抑制现象,使其只能贴壁生长;而且癌细胞的质膜结构发生了变化,间隙连接减少或者消失,细胞通讯受阻,发生成摞的生长
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问
lo2可以用高糖dmem培养吗?用1640长得太慢了感觉?
Xiong205
按照官方推荐培养基比较好,我做lo2不算慢,如果已经是太慢的程度,考虑是否是支原体污染,支原体污染的重要特征之一就是细胞生长速度明显变慢。可以检测一下培养液是否有支原体,如果有用biomy3清除14天左右。细胞状态会变好。
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问
有人用trizol同时提取rna和蛋白过吗?按网上的步骤提取的蛋白质是不是很很难溶解?
天一湖医者
具体的提取步骤如下:1.样品加氯仿分层后,移去上层水相(该水相里就是RNA,可照常继续进行RNA的提取),加0.3ml乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA,涡旋混合,室温放置3分钟,2-8℃不超过2000×g离心5分钟。【注:这一步同时可以除去未完全消化的残渣】2.小心吸出沉淀后的上清,加1.5ml异丙醇沉淀蛋白质。室温放置10分钟,2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。3.加2ml含0.3M盐酸
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问
为什么用LPS诱导不出BV2细胞的炎症?
Eason老歌迷
应该是你的lps问题。LPS它的说明书上写的是:”在缓冲液或培养基中浓度为1 mg / ml的溶液在2-8°C的温度下稳定大约一个月。冷冻的最多可保存2年。 不建议重复冷融。 溶液应储存在硅烷化的容器中,LPS可以与塑料和某些类型的玻璃(特别是浓度<0.1 mg / ml)结合。 如果LPS浓度> 1 mg / ml,则对小瓶侧面的吸附可以忽略不计。“
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