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        一般拿到细胞后,应该注意什么?

        相关实验:细胞传代实验

        user-title

        小露娜i

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        4 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

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        拿到细胞以后呢,就先不要开盖,放在培养箱里放一段时间,在显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞拍照,观察培养基的颜色,有没有漏液情况,细胞有没有污染 。

        user-title

        ZIWENHUA

        有帮助

        牢固问题。⽐如293T,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶⼦⾥⾯,会发⽣⼤⽚的脱落,细胞聚集在⼀起,但是细胞⽣长还是正常的,通过离⼼收集,加以胰酶的消化,重新打散,⼜可以正常的贴壁⽣长。

        2.当通过上⼀步的观察,细胞初步没有任何问题时,进⾏下⼀步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中⼤部分培养基,仅保留5到10mL培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后每天观察。细胞在低于正常⽣长温度情况下,会调整为静⽌期,或者慢速⽣长期,必须恢复37度的环境⾄少3个⼩时左右,才能重新调整到接近对数⽣长期的状态,在对数⽣长期进⾏细胞的传代会⼤⼤增加传代的成功率,和细胞的存活率。

        3.如果经步观察发现细胞密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个⼩时需要⽴即传代。传代的⽐例应依据不同的细胞⽽定。对于⽣长⽐较快,状态稳定,不易受外界影响的细胞可以⼀次多传⼏瓶;对于⽣长较慢,细胞⽐较薄,状态容易波动的细胞类型,⼀次少传些,保证每瓶细胞密度⼤些,便于稳定⽣长。⾄于⼀些⽐较陌⽣的细胞,次处理也可以依照第⼆种情况。

        传代操作:

        1.吸除培养瓶内旧培养液。2.加⼊⽆菌pbs洗液(5-8mL)轻轻润湿细胞,稀释多余的培养基,之后吸⾛洗液,动作要轻,不可吹打到细胞。3.向瓶内加⼊含0.25%EDTA的胰蛋⽩酶混合液少许,以能覆满瓶底为限。4.置温箱中2~5分钟,⼀旦镜检发现细胞质回缩,细胞间隙增⼤后,细胞变圆,⽐较松动后,⽴即终⽌消化。

        user-title

        未来9

        有帮助

        从物流收到细胞后,先检查培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊,并核对瓶身上的标签信息,细胞数量是否与发货清单一致

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

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