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问
免疫共沉淀的方法更适用于检测哪种物质?对于样本需要怎么样的处理?新手应该注意哪些方面?需要用到的仪器是哪些?
Kimser
适用于:检测兴趣蛋白质,样本:需要加入细胞裂解缓冲液也就是蛋白酶抑制剂,新手注意:每种细胞裂解条件不同,如果没有人带你,可以做对照实验,还有就是注意不要用太多,多看看说明书要求,注意避免污染仪器:离心机,ep管,离心管,电泳仪,电泳槽,色谱仪,刮刀等
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问
加非特异染色阻断剂后是直接甩去即可还是甩去后需要冲洗三次?
dxy_gwrp7ndq
除去PBS溶液,加100μl非特异染色阻断剂,室温下孵育10分钟。即直接甩去,不需要冲洗
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问
请问在做western blot,IF,IHC等实验中,二抗可以用鼠二抗吗?
府宅
可以使用鼠二抗,疫学试验中常通过封闭试剂来封闭未吸附蛋白的固相载体部位,以减少非特异性结合背景的影响。如WB 试验中常用5% 脱脂奶粉或者BSA 封闭膜上除转印蛋白占据的其它部位。除了用于封闭未吸附蛋白的固相载体,封闭试剂也被广泛用于封闭其它非特异性结合。如IHC、IF 等试验中,特异性抗体与样本中Fc 受体的结合,以及在IHC 和IF 双染或三染实验中,驴血清也被广泛用于封闭试剂以减少抗体之间的
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问
免疫组化实验中,常用哪些封闭液?
小布丁瑶瑶
一般的抗体封闭液是5%的脱脂奶粉或者1-10%血清,最好的是二抗来源动物的血清。
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问
免疫组化中,什么时候采用柠檬酸修复,什么时候采用EDTA修复?
dxy_gwrp7ndq
高温高压pH6.0柠檬酸盐缓冲液修复,适用于绝大多数抗原。需要用95℃热水浴EDTA(pH9.0)修复20分钟。适合于:CD10、CD138、Bcl-6、MuM1、VEGF、CD31、CD117、CD30、Cyclin D1、TdT、ALK。用柠檬酸修复后,切片需浸泡在修复液中,自然冷却;而用 EDTA 修复后,切片可直接从修复缸中取出,直接进行下一步。用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。
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问
间接法酶联免疫反应中如何控制二抗浓度?
dxy_gwrp7ndq
可以分别加入1:2000,1:10000,1:50000 二抗,进行滴定
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问
请问Elisa实验需要几个技术重复呢?
府宅
ELISA实验要重复三次,每个样本做两个复孔
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问
免疫组化,切片出现断裂,是什么原因呢?
小布丁瑶瑶
透明时间过久容易导致断裂,可根据组织透明情况来使用二甲苯透明,另外试剂还是需要定期更换的
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问
问:标本流水冲洗可以超过24h吗?
师医生说
标本的流水冲洗在染色步骤中至关重要,要尽可能的控制水压和注意评估流水的酸碱度,在保证,均匀的流出情况下,有很好的分化和反蓝作用,是可以适当延长时间的
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问
流式连续表达怎么画门?
txs900416
一般会设置对照组,例如荧光减一组,isotype同型对照组,这样根据这种对照组区分阴性表达的上限,这样可区分连续表达分子的阴性和阳性。
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问
请问使用辣根过氧化酶(HRP)标记时,是否在后续的封闭液不能加叠氮钠?
府宅
叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性,在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠氮钠。
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问
标本固定超过一个星期还有用吗?
府宅
标本放了一周能否使用,还与标本要做何种检查有关。若是做微生物学检查,活检标本放了一周则不能使用,因为微生物学检查需要保证活检标本的新鲜程度,放了一周的标本已经不够新鲜。如果是为了查病理或细胞学检查,不需要保证标本的新鲜程度,这时即使活检标本放了6天也能用。如果在取到标本当时及时进行了 固定处理,这种标本可以较长时间的进行保存,保留一个月是仍然可以用的。否则,组织细胞会很快发生溶解破坏,长时间的放置
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问
请问Elisa法检测细胞实验中细胞因子的浓度的原理是怎样的呀?
dxy_gwrp7ndq
细胞因子的ELISA检测常采用双抗体夹心的方法进行检测,采用抗同一细胞因子不同表位的两株单克隆抗体,或一个单克隆抗体和一个多克隆抗体。一个抗体用于包被作捕获抗体,另一个抗体标记酶,作为检测抗体。
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问
小鼠肝细胞PCR怎么测?
彭文彬
可取米粒大小肝脏,提rnd逆转录!
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问
取器官标本前一定要放血吗?
txs900416
这取决于取标本的目的。例如标本需要提取损伤敏感的蛋白(DAMP)之类,放血可能造成damp的释放增加,此时不应放血,应迅速将样本置于液氮;又例如样本要包埋切片进行染免疫荧光等染色,此时红细胞的染色背景可能会影响实验结果,最好是放血。
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问
肝脏油红O的染色步骤
府宅
1. 油红O染色液的配制油红O染色液分储备液和工作液。①油红O储备液的配方:100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉,充分溶解,过滤,4度避光保存。②油红O工作液的配方:实验前,将储备液与蒸馏水按3:2稀释,过滤(滤纸或极性滤膜配1mL注射器),酒红色且无沉淀。现配现用原则,避免工作液出现沉淀。2. 60%异丙醇的配制60%异丙醇的配方:100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL,4度保存
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问
western blot 转膜及条带问题
dxy_gwrp7ndq
1.洗膜不充分,增加洗涤液的体积和洗涤次数;在洗涤液中加入Tween=20。2.二抗浓度过高,引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用,适当降低二抗浓度,可以分梯度进行。3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一,这是因为二抗是多克隆抗体,使用单克隆抗体的二抗,此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的,其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然,有时,单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一,如果两种蛋白质的抗原免疫簇
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问
怎么避免抗癌药物对自身造成伤害?
府宅
严格控制抗癌药的用量,可以预防性使用保护性药物,如护肝、护肾的药物
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问
免疫组化染色为什么有杂点?
府宅
组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色,最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加制备第 二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清蛋白,可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。
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问
染色最重要的操作步骤是哪个
bigred大红
样本前期处理和敷抗体都是关键步骤。
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