请问Elisa法检测细胞实验中细胞因子的浓度的原理是怎样的呀？

细胞因子的ELISA检测常采用双抗体夹心的方法进行检测，采用抗同一细胞因子不同表位的两株单克隆抗体，或一个单克隆抗体和一个多克隆抗体。一个抗体用于包被作捕获抗体，另一个抗体标记酶，作为检测抗体。

双抗夹心法

1）包被：将细胞因子抗体吸附在酶标板表面，形成固相抗体。

2）用封闭液中的蛋白如牛血清白蛋白封闭标板表面剩余的吸附位点。以避免对后线测定中抗原抗体的非特异性吸附。

3）加入被测标本进行孵育，则其中的被测细胞因子就与固相上的抗体发生特异性结合，不发生结合的其他成分可通过洗涤去除。

4）加入辣根过氧化物醇 HRP 标记的抗细胞因子抗体进行孵育，则酶标抗体也与细胞因子发生特异性结合。被结合的酶标抗体的数量与细胞因子的浓度成正比。

5）洗涤去除多余的酶标抗体，再加入酶催化的底物，在酶的催化下，底物形成有色产物。

6）作用一定时间后，终止酶促反应。测定产物颜色，可以反应酶浓度高低，间接反映被测细胞因子的浓度。通过已知标准样品的对照，就可以推算出待测细胞因子的浓度。

一般双抗体夹心法：首先使用过量细胞因子特异性的抗体包被酶标板，再加入检测样品或标准品，之后使用与包被抗体目标位点不同的hrp标记（或其他酶标记）的二抗使之与捕获到的细胞因子结合。最后利用酶催化反应，通过显色和分光光度计，确定不同检测样本的读数，使用已知浓度标准品和读数绘制标准曲线，再计算检测样品的浓度。