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科研学霸天团,48小时有问必答
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求助IPP分析免疫组化图片问题
Dr_劉医生
一般累积光密度IOD(SUM)或者平均光密度Density (mean)/面积area
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问
救命!检测活性氧ROS为啥对照组特别亮啊
周末也要努力呀
你用的哪家试剂啊?不同厂家有些不稳定
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问
求经验分享
Dr_劉医生
密度梯度离心其实照着试剂盒操作即可,也不复杂;以下是配制和使用方法:Percoll的原液(未稀释)必须先加入高盐溶液或者高浓度蔗糖溶液,目的是维持最终所得密度介质的生理盐浓度。最快捷简单的方法:一步法直接稀释Percoll。无菌条件下,在离心管中加入1/10总体积的1.5M NaCl或者2.5M的蔗糖溶液(例如制备100mL工作液,则需要加入10mL的高渗溶液,分离细胞时选择NaCl较多,而分离亚
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问
有点急,求助!就一种细胞,就染一个色,阴性组荧光信号值跟阳性一样,并且后面实验组出现了双峰,这是什么原因呢?该如何改进?感谢!!
bamboopiggy
1.你的阴性组是没染的吗?如果是没染的,但是和你的阳性组没有区分的话,说明是你的阳性组没有染上。你最好再找一个比较solid的阳性对照试试,看是不是你的操作有问题。2.后面出双峰,可能是你的细胞的状态有问题的,会分为两群。
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问
免疫荧光相关问题,求助一下?
Injector2016
完全没有问题的,我就这么干过,泡了两晚信号还是挺不错的。泡在pbs里,避光4°c保存
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问
细胞免疫荧光实验封片的问题?
bamboopiggy
可以买固态封片剂,那个滴上以后,盖上盖玻片,一会就凝固住了,比较方便。
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免疫组化封闭液中叠氮化钠可以用其他试剂代替吗?
Leo2019
如果要用类似的产品起到抑菌作用,可以使用牛莎PC-950来替代叠氮钠
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问
EdU的使用
Eason老歌迷
你要是检测核酸产物,建议你还是用qpcr,或者是做电泳。edu是染细胞增殖的。
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IL-2增殖,一定要用ConA吗,不能直接加工程菌产的IL-2做实验吗
陈文豪平邑
不一定,直接加工程菌产的lL-2.EdU是我们检测细胞增殖的最新技术,灵敏度、精度等都要比以前的好得多!而且操作简单、方便,没有任何毒性,可以用于几乎任何增殖、周期相关的体内试验和细胞试验!
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脾脏结肠样本流式分析tregth17
Eason老歌迷
最好是别这样!因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这样才能区分死亡、凋亡和活性细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测了,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。我以前也试图将组织存入-80℃,然后进行流式检测,结果发现后来处理的组织细胞不是粘团就是破碎,根本无法检测。如果你实
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求问一下大佬,养的293t不贴壁是为啥
dxyc42u
培养皿不合适、培养基不合适(比如没有血清,或者血清错误)等,都可能出现这种情况。
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免疫荧光固定的问题?
Eason老歌迷
如果干了,是需要补加的,因为步骤就是把它放冷丙酮里固定10分钟。
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求助免疫荧光抗体问题?
bamboopiggy
只能说理论上是可以做的,但是建议你先做个预实验看看。每个抗体有每个抗体的特性,看预实验结果吧。
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wb目的蛋白不好曝,必须用超灵敏的发光液才能曝出来怎么办
bamboopiggy
1.超灵敏的发光液能曝光出来就可以啊。2.增加一抗和二抗的浓度。3,增加蛋白浓度
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问
做荧光补偿和电压调节有什么需要注意的地方吗?
此用户已注销
调节补偿时,一定要先调节好电压参数,才能调节补偿,补偿调节完成后,电压参数不能改变,若是免调电压的仪器则不必这样
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小鼠脾脏、淋巴结和全血在液氮冷冻,-80冻存后还可以做流式吗?
丁香一方
可以做,冷冻需要加保护剂。切解冻迅速。避免细胞液出现冰晶,刺破细胞!
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问
在流式实验中如何确定低表达分子的阴阳细胞群
你好几和户
不清楚抗原表达情况的时候,一定要使用同型对照来界定阴性细胞群。
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问
AM/PI活死细胞染色红绿荧光重叠问题
哼哼哈哈Yolk
请问你解决了吗,我也遇到了同样的问题,红绿荧光重叠在同一个细胞内
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请问DAP(二氨基庚二酸)缺陷型菌株保菌过程有大佬赐教嘛?
Eason老歌迷
看过几篇文献,可以推荐给你。“大肠杆菌细胞水解液中的二氨基庚二酸”、“深化重点,解析难点,培养综合创新素质——细菌接合教学方法的探索”。
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问
求助,Hif1a的ChIP
天雨心晴
缺氧箱也可以,只要能诱导出低氧应答就行。
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