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脾脏结肠样本流式分析tregth17

相关实验:免疫组织化染色

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Yuki_ONE

各位老师好,想请教一下我要检测流式小鼠脾脏以及结肠组织中treg以及th17,但因学校被封闭无法及时上机检测,请问可以先从组织中提取出细胞-80冻存等待解封再进行测定吗,和普通的细胞复苏冻存步骤有何不同,这样会不会影响胞内因子以及细胞表面抗原标记呢,或者有没有更好的方法保存样本减少对结果的影响呢?期待各位大佬解答,不胜感激!

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3 个回答

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Eason老歌迷

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最好是别这样!因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这样才能区分死亡、凋亡和活性细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测了,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。我以前也试图将组织存入-80℃,然后进行流式检测,结果发现后来处理的组织细胞不是粘团就是破碎,根本无法检测。如果你实在找不到可以检测的流式细胞仪,我建议你可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

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Yuki_ONEuser-title

请问老师原位染色可以检测th17还有tregfoxp3表达吗,这些是胞内因子呢。或者我冻存10M细胞到液氮复苏之后有6M活性较好的培养回复一下上机可以嘛

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Dr_劉医生

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不能,小鼠脾脏取材后首先就得制备成单细胞悬液,你不能直接冻存再复苏做流式,而且你在分选treg的时候有些还需要破膜处理,所以不行;当然做流式分析的步骤也不麻烦,照着试剂盒操作即可;

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Yuki_ONEuser-title

主要是因为疫情的原因封闭了流式实验室,没有办法立即上机做检测,小鼠模型来之不易啊,所以想把细胞冻起来,不行的话冻到液氮可以吗,或者您有更好的保存方法建议吗~

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此用户已注销

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流式的样品需要的是单细胞,所以不能负80啊,冻融直接就会导致细胞溶胀就没办法测了,都是取完材料了直接标流式抗体上机测,或者标好之后用多聚甲醛固定可以不用即时测。

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Yuki_ONEuser-title

请问多聚甲醛里能放多久呢?因为疫情原因我可能得一个月以后才能检测的。主要是没有看到长期保存的方法,才出此下策,动物实验做一次不容易哎

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