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        IL-2增殖,一定要用ConA吗,不能直接加工程菌产的IL-2做实验吗

        相关实验:免疫组织化染色

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        此用户已注销

        我们的工程菌产IL-2,现在想看iIL-2活性,可以直接提取淋巴细胞后加IL-2吗

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        4 个回答

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        丁香一方

        有帮助

        不一定

        IL-2的生物活性测定需要稳定、敏感的IL-2测定细胞。

        IL-2测定细胞大体可分为两大类:一类是IL-2依赖性细胞株(CTLL-2 )。其特点是只有在IL-2存在的培养条件下才能生长,否则会在24小时内死亡;另一类为新鲜制备的对IL-2有反应性的淋巴母细胞,这类细胞在IL-2存在的培养条件下生长能力增强,但无IL-2存在时并不死亡。这类细胞可替代第一类IL-2的检测。在培养过程中,加入待测溶液,如果细胞能够生长,表明待测标本中有IL-2。为了获得较好的特异性,常使用IL-2依赖性细胞株(CTLL-2)。

        ConA可使T淋巴细胞转化为淋巴母细胞。淋巴母细胞为IL-2反应细胞,可表达丰富的IL-2受体,该细胞可在体外连续培养并与IL-2含量呈试剂依赖关系。它对有丝分裂素(如ConA)无反应性或反应极微。因此,在无CTLL细胞株的情况下可用该细胞做IL-2检测。

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        陈文豪平邑

        有帮助

        不一定,直接加工程菌产的lL-2.EdU是我们检测细胞增殖的最新技术,灵敏度、精度等都要比以前的好得多!而且操作简单、方便,没有任何毒性,可以用于几乎任何增殖、周期相关的体内试验和细胞试验!

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        可以直接提取T淋巴细胞,但注意细胞培养的过程;之前自己做实验存的IL-2生物活性检测的SOP可供参考:

        a.CTLL-2细胞制备:取传代培养24-48小时对数生长期的CTLL-2细胞,用培养液离心洗涤2次,每次1000r/min离心5分钟,再用10%FCS-RPMI-1640培养液调整细胞浓度为undefined105/mL。

        b.加样:将细胞接种于96孔培养板,每孔0.1mL。同时将待测样品和标准品做倍比稀释,每孔加入0.1mL,每个稀释浓度均设3复孔。另设培养液对照孔(100μL细胞+100μL培养液)。37度,5%CO2孵育40小时。

        c.MTT掺入:轻轻吸取上清液100μL,加MTT(1mg/mL)100μL,37度,5%CO2孵育2小时。

        d.测定:离心培养板,2000r/min,5分钟,吸弃上清液,每孔加100μLDMSO,作用30分钟,用酶标测定仪于波长570nm测吸光值(A)。

        e.计算:用标准品浓度和对应的净A570nm值(实验孔-阴性对照孔的A570nm值)绘制标准曲线。根据标准曲线求出待测样品IL-2水平。

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        不一定吧、在无CTLL细胞株的情况下可用该细胞ConA做IL-2检测。

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