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免疫荧光实验通透剂的选择及原理
天一湖医者
一般用 0.1%皂角苷戒 0.02%的Triton X-100 进行通透。
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问
细胞免疫荧光实验抗原占位
土井挞克树
一般不存在,抗原占位多数可以通过提高抗体的特异性来避免
3 回答
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问
细胞转染了带FLAG的质粒为什么看不到荧光?
天一湖医者
和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.
4 回答
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问
做间接法免疫荧光染色要怎么设置对照?
土井挞克树
可以用已知的组织做阳性对照。或者直接做空白对照简单一些
3 回答
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问
多聚甲醛固定组织一定要在4度吗?可以在室温下固定吗?
土井挞克树
不建议,会加速组织脱水,影响后续实验
6 回答
6368 围观
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问
细胞免疫荧光染色的结果分析?
土井挞克树
首先考虑的是核蛋白破裂,破裂后就会造成核蛋白污染,产生这种结果
2 回答
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问
细胞涂片标本做免疫组化染色的方法
土井挞克树
免疫组化染色是用一抗与被检测组织中目的蛋白抗原结合,然后HRP等标记的二抗与一抗进行结合,最后通过DAB显色反应,进而确认所要检测蛋白抗原的定位、半定量等目的而石蜡切片是用he染色,不存在抗体结合,效果差
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问
免疫组化染色。冲洗的时候因为怕脱片所以我的片子有点干了,然后染出来结果就很不好,是因为干片么
土井挞克树
大概率是因为干片,片子太干染色非常容易失败
3 回答
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问
免疫组化,我染的标本总是会脱片一部分,想问一下煮片子的时候最适温度大概是多少
土井挞克树
一般70-80摄氏度是最好的,不建议太高温度
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问
免疫荧光实验,整个细胞片都出现荧光亮点原因?
土井挞克树
抗体特异性太差,更换特异性高的抗体再做。
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1890 围观
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问
免疫荧光实验,细胞很模糊,封片剂却明亮原因?
土井挞克树
还是抗体的问题,更换特异度高的抗体后再做。
3 回答
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问
怎么检测MDSC的免疫抑制作用?采用什么体外实验?
天一湖医者
1、MDSC+T细胞共培养,CFSE标记T细胞,流式检测T细胞增殖2、MDSC+激活后的T细胞共培养,ELISA检测培养上清中T细胞活化分泌IFN-γ的量
5 回答
1249 围观
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问
细胞里面有小的蓝色DAPI荧光,是细胞核碎了导致的吗?
huarenqiang5
主要考虑:第一,DAPI染料有没有问题;第二,切片有没有问题;第三,方法是否正确。
5 回答
958 围观
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问
免疫荧光整个细胞都有荧光,无法辨别目的蛋白的表达,抗体浓度也是按师兄师姐说的,怎么解决?
sswei
原因有二:一是二抗浓度过高,适当降低二抗浓度即可。二是二抗发生沉淀,可以使用过滤戒者离心荧光标记二抗。
5 回答
270 围观
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问
进行免疫荧光染色实验时,动物组织没有固定直接放OCT里了,冰冻切片后需要再固定吗?
sswei
组织不固定直接OCT里,冰冻切片需要再固定。
4 回答
1099 围观
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问
老板要求描述树突的长度和数量,不知道怎么弄?谁能提供一下帮助啊
sswei
树突的总长度可以通过用其所占的体积除以树突的平均横截面积来计算获得。
2 回答
339 围观
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问
免疫层析的那些示意图是用什么画的呀,我现在想画个免疫层析的试纸条,找不到合适的软件
土井挞克树
可以用image软件进行绘制示意图。
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442 围观
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问
想请教一下,对免疫荧光的数据处理是只能处理单通道的荧光强度吗?Merge 之后的图像只是用于直接观察吗?[皱眉R][皱眉R]
huarenqiang5
是的,免疫荧光数据处理必须将2个通道的荧光分割开,获得2张图像。从而处理单通道的荧光强度。如果是多色荧光标记就是多了通道而已,分割方法也是一样的。
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150 围观
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问
请问悬浮细胞(例如真菌的原生质体)应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉?
huarenqiang5
采用多聚甲醛固定法进行固定:A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次,200 g 离心 5 分钟;重悬细胞。C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞,细胞浓度约为 1x106/ml,室温下静置 15 分钟, 不时摇动。D. 200 g 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,重复洗涤细胞 2 次;E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透
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问
请问细胞免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞嘛,以及细胞固定后可以冻存嘛?
huarenqiang5
免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞。
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