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问
多聚甲醛固定组织一定要在4度吗?可以在室温下固定吗?
土井挞克树
不建议,会加速组织脱水,影响后续实验
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问
细胞免疫荧光染色的结果分析?
土井挞克树
首先考虑的是核蛋白破裂,破裂后就会造成核蛋白污染,产生这种结果
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问
细胞涂片标本做免疫组化染色的方法
土井挞克树
免疫组化染色是用一抗与被检测组织中目的蛋白抗原结合,然后HRP等标记的二抗与一抗进行结合,最后通过DAB显色反应,进而确认所要检测蛋白抗原的定位、半定量等目的而石蜡切片是用he染色,不存在抗体结合,效果差
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问
免疫组化染色。冲洗的时候因为怕脱片所以我的片子有点干了,然后染出来结果就很不好,是因为干片么
土井挞克树
大概率是因为干片,片子太干染色非常容易失败
3 回答
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问
免疫组化,我染的标本总是会脱片一部分,想问一下煮片子的时候最适温度大概是多少
土井挞克树
一般70-80摄氏度是最好的,不建议太高温度
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问
免疫荧光实验,整个细胞片都出现荧光亮点原因?
土井挞克树
抗体特异性太差,更换特异性高的抗体再做。
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问
免疫荧光实验,细胞很模糊,封片剂却明亮原因?
土井挞克树
还是抗体的问题,更换特异度高的抗体后再做。
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问
怎么检测MDSC的免疫抑制作用?采用什么体外实验?
天一湖医者
1、MDSC+T细胞共培养,CFSE标记T细胞,流式检测T细胞增殖2、MDSC+激活后的T细胞共培养,ELISA检测培养上清中T细胞活化分泌IFN-γ的量
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问
细胞里面有小的蓝色DAPI荧光,是细胞核碎了导致的吗?
huarenqiang5
主要考虑:第一,DAPI染料有没有问题;第二,切片有没有问题;第三,方法是否正确。
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问
免疫荧光整个细胞都有荧光,无法辨别目的蛋白的表达,抗体浓度也是按师兄师姐说的,怎么解决?
sswei
原因有二:一是二抗浓度过高,适当降低二抗浓度即可。二是二抗发生沉淀,可以使用过滤戒者离心荧光标记二抗。
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问
进行免疫荧光染色实验时,动物组织没有固定直接放OCT里了,冰冻切片后需要再固定吗?
sswei
组织不固定直接OCT里,冰冻切片需要再固定。
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问
老板要求描述树突的长度和数量,不知道怎么弄?谁能提供一下帮助啊
sswei
树突的总长度可以通过用其所占的体积除以树突的平均横截面积来计算获得。
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问
免疫层析的那些示意图是用什么画的呀,我现在想画个免疫层析的试纸条,找不到合适的软件
土井挞克树
可以用image软件进行绘制示意图。
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问
想请教一下,对免疫荧光的数据处理是只能处理单通道的荧光强度吗?Merge 之后的图像只是用于直接观察吗?[皱眉R][皱眉R]
huarenqiang5
是的,免疫荧光数据处理必须将2个通道的荧光分割开,获得2张图像。从而处理单通道的荧光强度。如果是多色荧光标记就是多了通道而已,分割方法也是一样的。
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129 围观
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问
请问悬浮细胞(例如真菌的原生质体)应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉?
huarenqiang5
采用多聚甲醛固定法进行固定:A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次,200 g 离心 5 分钟;重悬细胞。C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞,细胞浓度约为 1x106/ml,室温下静置 15 分钟, 不时摇动。D. 200 g 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,重复洗涤细胞 2 次;E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透
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问
请问细胞免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞嘛,以及细胞固定后可以冻存嘛?
huarenqiang5
免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞。
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问
投稿要求整张膜,如果二抗种属不一样,可以一起混合孵育吗?
huarenqiang5
二抗种属不一样不建议一起混合孵育。
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问
使用ChIP技术验证基因的转录调控
sswei
其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.
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问
小鼠大脑切片的免疫化学实验
sswei
包括阳性对照在内,全部呈阴性反应,原因可能是:①染色未严格按操作步骤进行;②漏加一种抗体,或抗体失效;③缓冲液内含叠氮化钠,抑制了酶的活性;④底物中所加H2O2量少或失效;⑤复染或脱水剂使用不当。
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409 围观
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问
co-ip时出现的IgG重链条带怎么解决
土井挞克树
换另外一种二抗的IgG,是非特异性结合
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