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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
做免疫荧光的玻片怎么处理才比较好呢?为什么放入玻片爬片后就染菌了呢?
申东熙老伯
可以用免洗的细胞爬片做免疫荧光,如果不是免洗的玻片可以在使用之前用镊子夹着过一遍火。
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问
磁珠分选和流式分选中对细胞的处理过程有什么不同?
土井挞克树
流式分选需要先制备单细胞悬液,然后染色才能进行分选
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问
FIIC标记的抗原如何用于抗体的流式分选?
土井挞克树
可以通过做同型对照,然后间接标记法进行FIIC抗原的流式分选
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问
流式分选抗体IgG和IgM,用来结合人PBMC中的B细胞,一般用鼠抗人抗体吗?
huarenqiang5
是的,流式分选抗体IgG和IgM,结合人PBMC中的B细胞一般用鼠抗人抗体。
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问
豚鼠皮肤免疫组化,为什么会出现黑渣子
huarenqiang5
考虑存在支原体或其他细菌污染了,建议及时处理。
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问
为什么视野中细胞与细胞之间存在散在的发光点?
土井挞克树
那是非特异性结合产生的背景荧光。属于干扰
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问
求大神看看这是怎么回事呢?
balalaLy
这是冰冻切片没有处理好出现的组织破碎了
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问
为什么磁珠优先吸附大片段而不是小片段?为什么磁珠表面带负电还可以吸附DNA?
huarenqiang5
磁珠会优先吸附大片段DNA,是因为在一定浓度的PEG和盐离子体系中,片段更长的DNA会因失水暴露更多的磷酸基团,然后在盐离子如钠离子的作用下,优先与磁珠结合,而更小的DNA片段则不结合。
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问
相同粒径的磁珠,是否提取DNA的能力就一样了?
huarenqiang5
相同粒径的磁珠提取DNA的能力不相同。
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问
封片的时候是周边点上封片液,还是点到中间,永久封片怎么弄?
huarenqiang5
封片的时候只需要在中间点封片液。 永久装片的封片方法,包括以下步骤: 1.封片胶包裹标本:将标本置于封片胶中,使标本与封片胶充分接触,在封片胶中缓慢拖动标本至标本周围无小气泡为止,取出标本,得到包裹有封片胶的标本;将包裹有封片胶的标本转移至盖玻片上,得到带有标本的盖玻片; 2.载玻片滴封片胶:在载玻片上滴加封片胶,得到带有封片胶的载玻
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问
免疫原性细胞死亡标志物HMGB1检测
sswei
可能存在有样品纯度低或操作时失误等情况。
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问
求助最近要做细胞免疫荧光
土井挞克树
如何可以使用质粒转染或者也可以进行胞吞入核,比较难,需要多练习
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问
RNA中有DNA污染的处理方式有哪些
huarenqiang5
彻底去除基因组 DNA 最为可靠的方法是采用 DNase I消化。 DNase On Column Kit 可配合 HiPure RNA抽提试剂盒一起使用。组织/细胞样品经裂解液裂解后,转移至 HiPure RNA Column吸附 RNA,加入 DNase至柱子的滤膜中消化去除 DNA,然后加入洗涤液洗涤去除 DNase 和降解的 DNA。 1
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问
如何解决合成cDNA第一链合成的引物退火不充分?
cherish1100
可以适当的改变退火温度,高或者低2度
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问
克隆PCR产物的最优条件是什么?
huarenqiang5
插入最佳片段后室温保温1h,或4℃过夜。在这2种温度下,缺T-凸出端的载体会自连,产生蓝斑。室温保温1h能满足大多数克隆要求,为提高连接效率,需4℃过夜。
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问
GM-DC诱导失败无数次,求大神指点
huarenqiang5
建议开始用不含GM-CSF培养至少3小时至几十小时后再加GM-CSF进行。
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问
做PE通道的正选细胞少阳性率不高
huarenqiang5
主要考虑以下几点:1.抗体质量问题;2.细胞密度过低;3.操作上的问题导致。
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问
有没有测甲基化相关酶活性的方法?
huarenqiang5
传统用于检测DNA甲基化酶活性的方法包括高效液相色谱法(HPLC), 聚合酶链反应(PCR),凝胶电泳,高效毛细管电泳(HPCE),以及使用同位素标记的s-腺苷甲硫氨酸甲基化检测。 替代的DNA甲基化酶活性测定方法,如放射法、比色法、荧光法、电化学法等。
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问
荧光微球标记出现聚集现象求助?
huarenqiang5
主要考虑以下几点原因:1.缓冲体系PH太低的问题。2.超声不完全,尤其在喷金前,就很容易出现堵膜现象。3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。4.微径大了,微球浓度过高。
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问
肌钙蛋白免疫荧光标记中的问题?
晴空a
建议使用 pH 7.0左右的偶联液,选择能够高度特异性结合肌钙蛋白的抗体,并进行充分的荧光微球活化和荧光标记过程控制,包括反应时间、抗体和微球的比例、荧光素的浓度等。
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