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科研学霸天团，48小时有问必答

问果蝇中去泛素化酶L5是怎么通过限制Som的泛素化来正向调节Hh信号？

土井挞克树

L5可以通过与染色体中聚合成分结合限制Som泛素化

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问荧光定量PCR中内标定量是如何使用内标定量的？内标浓度和样本浓度之间的公式是什么？怎么确定这个公式？

Dr_劉医生

其中，Csample是样品中待测组分的浓度，CIS是内标物的浓度，Asample是样品中待测组分的峰面积，AIS是内标物的峰面积，Astandard是对照品的峰面积。

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问线性化片段转入毕赤酵母SMD1168

汤姆卜丽波

你验证过片段是对的的话，如果是转了很多次都没有都没有阳性，那有可能是你的感受态细胞出了问题，就是转不上去

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问pcr的平台期为什么越跑越低？

loveliufudan

PCR反应的平台期的高低受到许多因素的影响，包括PCR反应体系中的成分、放大区域、反应条件等等。在同一个样品内，重复跑PCR会有平台期高低不一的情况，这可能是由于样品的质量和含量的差异，反应条件的变化，PCR反应体系的变化等因素导致的。此外，error bar的大小也受到许多因素的影响，例如PCR反应的可重复性、PCR引物的设计、模板DNA的质量等等。因此，要使error bar变小，需要优化PC

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问PCR跑完没有溶解曲线

sswei

可能由于引物没有把目的片段pcr出来。

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问抗肿瘤活性细胞实验，初筛活性很好的，做不出IC50是什么原因?

z流沙z

一个可能是细胞状态不一样，另外一个是药物可能降解了，要进行分装

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问骨巨细胞瘤，如何能够准确操作

sswei

培养方法1.在无菌条件下取骨巨细胞瘤质脆软的部分，用含青霉素/链霉素的无菌1xPBS缓冲液浸洗3遍，每次10min，至颜色淡白。2.用灭菌后眼科小剪轻轻剪碎，加入现配的无菌II型胶原酶工作液（1mg/ml II型胶原酶+2xP/S双抗+1%FBS）重悬，移入15ml离心管中。3.置于37°培养箱（5%二氧化碳）内摇床，消化数小时或过夜。4.消化结束后，使用200目滤网过滤，1000r/min离心5

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问生信ssGSEA免疫浸润分析

土井挞克树

是指0或1再进行定量分析的时候可以删除，定性的时候不需要删除

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问分离单个核细胞有比较好的Ficoll试剂吗？看的大多数都是淋巴细胞分离液,没有PBMC分离液，求助谢

Dr_劉医生

Ficoll本身就可以用来分离PBMC，Ficoll 密度梯度离心法可以用于分离外周血单个核细胞。该方法的原理是：单个核细胞的体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为 1.092 左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075 左右。具体可以看丁香通里的这篇文章https://www.biomart.cn/experiment/430/488/715/2715661.htm

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问干扰素-γ诱导RAW264.7细胞最适浓度？

土井挞克树

一般比较合适的诱导浓度是60-80ng/ml

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问糖链分析

loveliufudan

有几家公司提供糖组学服务，比如上海之江生物技术有限公司、北京芯城生物科技有限公司、上海先临生物科技有限公司等。你可以通过他们的官方网站或客服咨询具体的糖组学服务内容。至于查找某一种疾病中IgG的具体糖型，一般可以通过文献检索或专门的数据库查询来获取信息。比较常用的数据库包括UniProt、GlycoEP、GlycoSiteDB等，其中UniProt是公认的生物信息学资源之一，它收集了各种蛋白质及其

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问少突前体胶质细胞提纯

土井挞克树

振荡器和摇床的区别在于振荡器的频率一般比较高，如果买振荡器要注意一下频率

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问腹腔注射

z流沙z

应该是插入腹腔了，可以注射点空气或者pbs

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问免疫组化看信号

z流沙z

蓝色的是细胞核，目的蛋白是棕褐色的

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问请问组化的片子，细胞膜也能被染上蓝色吗，小白，啥么看不懂，也看不到目的信号，目的蛋白应该是什么颜色请问🥹

是TTT

一般来说，细胞核染成蓝色，目的蛋白染成棕色，应设计阴性对照避免假阳性等

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问求助｜RAW264.7巨噬细胞吞噬中性红

sswei

原因有:1. 过度消化，某些用于组织分解的酶，如胰蛋白酶，如果过量使用会导致细胞结块；2. 环境压力，物理压力和反复的温度变化会导致细胞死亡，从而导致细胞的“粘性”的DNA分子将相邻的细胞连接在一起；3. 组织分解，在制备单细胞悬浮液时，使用酶、机械或化学分解策略可使细胞破裂，从而导致碎片的聚团；4. 过度生长，当细胞在其培养基中密度过大的时候，细胞将开始溶解并释放碎片，碎片中的粘性因子会将细胞聚

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问如何减少单抗糖化的发生几率？

sswei

清除自由基可延缓糖化进程。超级抗氧化剂Delphinol®将显著增加体内抗氧化剂的效力及利用率，同时减少体内自由基或降低其产生速率，这将有益于健康，有助于延缓糖化和老化过程。

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问单抗糖化发生的位置有哪些？

sswei

研究发现尽管赖氨酸位点较多，但通常单抗整体的糖化比例不高，而糖化修饰也主要发生在个别赖氨酸位点上，这些热点赖氨酸主要与其空间分布有关，通常分布在抗体分子表面的赖氨酸容易与还原性的糖结合。除此之外，糖化位点附近的氨基酸残基也会影响糖化的产生。研究表明，赖氨酸附近的羧酸可以通过促进Schiff Base转化为Amadori 产物，从而加速糖化，而临近的天冬氨酸也会促进糖化的发生。

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问蛋白翻译后修饰会造成碱峰增加的有哪些？

sswei

容易发生修饰如脱氨、异构、氧化等变化情况，会造成碱峄增加。

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问细胞上清前列腺素E2检测

这条小鱼也在乎

你好，请问你的PGE2测出来了吗，我现在正在做，感谢，

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