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        PCR跑完没有溶解曲线

        相关实验:细胞因子检测

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        serendipityDW82

        请问各位大佬为啥我跑的pcr没有溶解曲线呀?图片描述

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        6 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        可能由于引物没有把目的片段pcr出来。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        首先程序上是否正确设置了溶解曲线。其次是否正确添加Rox。最后有一些基因没到平台期,可以增加模板上样量。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可能是引物没有设计好,建议更换引物

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下原因:

        低浓度的样本:如果你的模板 DNA 或 cDNA 浓度很低,那么可能无法检测到信号,因此没有观察到溶解曲线。建议在实验中使用较高浓度的样本。

        没有模板 DNA:在 PCR 试剂盒中加入反应缓冲液和引物,但没有加入模板 DNA 或 cDNA,则不会观察到溶解曲线。

        引物的浓度过高或过低:如果引物的浓度过高或过低,可能会影响 PCR 反应的灵敏度和特异性。建议按照建议的浓度使用引物。

        PCR 反应条件不合适:如果 PCR 反应条件不正确,如温度不够高或时间不够长等,可能会导致 PCR 反应失败,从而无法观察到溶解曲线。建议检查 PCR 反应条件并进行优化。

        荧光信号过低:如果荧光信号太低,可能会导致无法观察到溶解曲线。可以尝试使用更高灵敏度的仪器或增加荧光染料的浓度来增加信号。

        需要注意的是,有些 PCR 试剂盒可能并不会产生明显的溶解曲线,具体需要根据试剂盒的说明进行判断。

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        可能有以下原因:

        1. PCR参数设置错误:在设计循环参数时没有设置荧光信号采集;
        2. 模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况;
        3. 引物或者探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性;


        user-title

        balalaLy

        有帮助

        应该是你跑之前设置程序的时候没有设置

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