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        丙酰CoA活性可以测定吗?

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        求助丙酰CoA活性测定方法

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        检测方法有高效液相色谱仪或者酶标仪测吸光度。

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        Dr_劉医生

        有帮助

        丙酰CoA活性测定的方法有很多种,其中比较常用的是荧光法、比色法和放射性同位素标记法。荧光法和比色法都是基于酶反应后产生的NADH或NADPH的荧光或吸收光谱变化来测定丙酰CoA的活性,而放射性同位素标记法则是将丙酰CoA标记上放射性同位素,通过测定其放射性来测定丙酰CoA的活性。

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        loveliufudan

        有帮助

        以下是一种测定丙醚-CoA活性的方法:

        材料和试剂:

        磷酸二氢钾(KH2PO4)0.1 M缓冲液,pH 7.4

        NAD+(辅酶),1 mM

        CoA(辅酶A),10 mM

        丙酮酸,10 mM

        丙醚

        96孔微孔板

        分光光度计

        操作步骤:

        准备反应混合物:在96孔微孔板中加入100 μL磷酸二氢钾缓冲液、1 μL NAD+(1 mM)、2 μL CoA(10 mM)、1 μL 丙酮酸(10 mM)和1 μL丙醚,使总体积为105 μL。

        在反应混合物中加入5 μL ddH2O作为空白对照,用分光光度计在340 nm下测量吸光度。

        在反应混合物中加入5 μL丙醚,混匀,放置在25°C恒温箱中孵育10分钟。

        用分光光度计在340 nm下测量吸光度。

        计算:

        丙醚-CoA活性 = ΔA/min × 系数 × 反应体积(mL)/反应时间(min) × 1/2.76

        其中,ΔA为试验组与空白组的吸光度差,系数为6.22×10^-3,1/2.76为乘以2个反应物的摩尔比例。

        需要注意的是,该方法仅供参考,具体操作应根据实验需要进行调整和优化。另外,鉴于丙醚的毒性,实验过程中应注意个人防护措施,操作时需保持通风良好。

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