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两个蛋白有互作,加到缓冲液里共同孵育,缓冲液:蛋白1:蛋白2的体积配比应该是多少

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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蛋白1:CCL20  蛋白2:组织蛋白酶B,缓冲液:PBS或Tris-HCL

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百泰派克-李工

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两个蛋白质进行相互作用实验时,缓冲液与蛋白质的体积比通常取决于需考虑多个因素,包括蛋白质的浓度、活性、相互作用的类型和强度,以及实验的特定目的。没有统一的“一刀切”配比。

一、配比的选择:

一个常见的起点是使用等摩尔的蛋白质,即蛋白1和蛋白2的摩尔浓度相同。例如,如果两个蛋白质的分子量相似,可以尝试按体积1:1混合。

然而,根据两蛋白之间的互作类型和亲和力,可能需要调整这个比例。对于低亲和力的互作,可能需要增加一个或两个蛋白的浓度。

二、缓冲液的体积:

缓冲液的体积应足够以保持蛋白质稳定,并允许足够的空间进行互作。通常,蛋白质的总体积不应超过总反应体积的一半。

虽然可以从等摩尔比例或等体积比例开始(例如蛋白1:蛋白2 = 1:1,加入足够的缓冲液以维持蛋白稳定),但最终的最佳比例需要根据具体的实验目的和蛋白质的特性来确定,并通过一系列实验进行验证和优化。


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