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        COIP IgG组有明显的条带是怎么回事?

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        断爱天堂

        我用A蛋白抗体进行IP,检测A蛋白与B蛋白的相互作用,图片描述用A抗体进行WB显影,最上边一行是重链,下边一行左边第一个是igG组,应该是无条带的,图片描述然后用B抗体WB显影,左边第一个igG组同样有很粗的条带。是什么原因呢?

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        5 个回答

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        可能是目的蛋白可以与IgG或珠子非特异性结合,可以考虑改一改实验设计,一个转空载质粒、一个转FLAG融合蛋白,都用anti-FLAG抗体做Co-IP,就不需要再用IgG。

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        bamboopiggy

        有帮助

        换另外一种二抗的IgG,是非特异性结合

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        汤姆卜丽波

        有帮助

        可能你的目的条带在轻链或重链附近,所以IgG对照组也有条带

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        土井挞克树

        有帮助

        原因可能是没洗干净,如果是这个原因,随便再用几种其它抗体,也能检测到类似条带。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        样品是否煮样?lgG的轻链大小25KD,重链大小为50KD,所以很有可能是重链。建议IP抗体和WB抗体使用不同种属来源的一抗。

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