蛋白复性缓冲液的使用

wangcaixia1：

我是第一次做蛋白表达，所表达的蛋白是以包涵体形式存在的，包涵体经过洗涤、溶解后进行复性，采用不同尿素浓度（4.5、3.5、2.5、1.5、0.5、0）的复性缓冲液进行复性，我想请教的问题是这一系列不同尿素浓度的复性缓冲液可以重复使用吗？如果是不同的蛋白可以重复使用吗？

丁香园网友panmo2006认为：

不知道你用的是哪一种表达载体，如果是融合表达载体pGEX时候，在透析复性的时候只需要采用4M，2M的两个梯度就可以直接上亲和柱子；如果是pET载体，可以在变性条件下直接上Ni柱，然后在柱上复性.

丁香园网友wangcaixia1认为：

我用的是pGEX-6p-1载体，我想问的是复性缓冲液可以重复利用吗？也就是可以用过一次后，再用来复性其他蛋白吗？

丁香园网友panmo2006认为：

完全可以啊，但是你不要忽视了使用后的复性液里面各种成分的浓度（如尿素、氧化型还原型谷胱甘肽的等）都要发生变化，那你下次再处理该蛋白时，你的条件怎么确定呢，就是说重复性很难把握。