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        RAW264.7诱导破骨细胞

        相关实验:破骨细胞的分离培养

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        如你所见228

        使用RAW264.7(普诺赛)第七代,undefined104个/cm2接种于24孔板,12h后更换为含50ng/ml RANKL(pepro tech分装后于-20℃保存)的10%FBS高糖培养基培养液,1-2天换次液,第6天行TRAP染色(35min)+甲基绿染色(5min)。未染色之前没有看到典型的破骨细胞,染色之后有好多小细胞都是红色的,(图1、2)请教各位老师,这是怎么回事呢?细胞个数太多了吗?之前用96孔板接种2000个/孔也是类似的结果(图3、4)。图片描述图片描述图片描述图片描述

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        首先,对于未染色之前没有观察到典型的破骨细胞,可能是因为破骨细胞需要更长的时间来分化和形成。您在第6天进行TRAP染色,但有时需要更长的时间才能观察到明显的破骨细胞形成。您可以尝试延长培养时间,观察是否会出现破骨细胞的特征。

        关于染色后出现很多小细胞呈红色的情况,这可能有几种可能的解释。首先,这些小红色细胞可能是RAW264.7细胞的前体或早期破骨细胞,它们正在分化并准备形成成熟的破骨细胞。这可以解释为什么在未染色之前您没有看到典型的破骨细胞,因为它们可能还处于早期分化阶段。

        另一个可能的解释是,培养条件中的RANKL浓度可能过高,导致破骨细胞分化速度加快。这可能会导致较多的小细胞形成,但同时可能会减少破骨细胞的成熟程度。您可以尝试减少RANKL的浓度,观察是否会对破骨细胞的形成和成熟产生影响。

        最后,您提到在之前的96孔板实验中也观察到了类似的结果。这可能说明您使用的培养条件或实验步骤中存在一些问题。建议您仔细检查实验步骤、培养基配方、细胞密度等因素,以确保实验条件的准确性和一致性。

        user-title

        如你所见228user-title

        谢谢您的回答,解决了我的疑惑,我接下来会按照您的建议改善实验,谢谢老师,祝您生活愉快

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        是的,细胞浓度太高了,建议降低细胞浓度试试看。

        user-title

        如你所见228user-title

        谢谢您的回答,我再试一下低浓度,祝您生活愉快

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        你的细胞密度太大了,很容易培养失败,建议降低细胞密度再做

        user-title

        如你所见228user-title

        谢谢您的回答,这个浓度是参考了几个文献中最低的那个,应该还是高了,我再试试低一些的浓度梯度,祝您生活愉快。

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