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        【求助】RAW264.7诱导破骨细胞

        丁香园论坛

        9558
        求助,本人用RAW264.7细胞诱导破骨细胞一直失败,96孔板,2000个细胞/孔,RANKL50ng/ml,M-CSF25ng/ml,5到6天后TRAP染色一直没有看到理想的结果,各位前辈有做过这个实验的请传授经验,培养RAW264.7细胞的时候是否有些特别注意事项,如何使RAW264.7的状态达到最佳?以及关于TRAP染色有什么需要注意的,多谢
        同问,最近一个同事也要做RAW的诱导
        同问,顶起来!
        我用24孔板做过,培养基用DMEM,RANKL 浓度10-50nM,处理4天,中间换液一次,trap染色后镜检分化率还可以的。我觉得细胞状态比较重要。Raw细胞应该是小而圆的形状,显微镜下观察很亮的那种。可惜保存的状态好的细胞都用掉了,后来细胞估计是分化了,形状改变,不够圆而亮,而且变大了,甚至有的伸出伪足,这样就很不好了,如果用这种细胞诱导破骨细胞的话,估计很难看出诱导和对照的差异。
        gypsy wrote:
        我用24孔板做过,培养基用DMEM,RANKL 浓度10-50nM,处理4天,中间换液一次,trap染色后镜检分化率还可以的。我觉得细胞状态比较重要。Raw细胞应该是小而圆的形状,显微镜下观察很亮的那种。可惜保存的状态好的细胞都用掉了,后来细胞估计是分化了,形状改变,不够圆而亮,而且变大了,甚至有的伸出伪足,这样就很不好了,如果用这种细胞诱导破骨细胞的话,估计很难看出诱导和对照的差异。

        请问楼上现在还有比较好的RAw么?
        同问,有没有对RAW264.7细胞比较了解的高手,感觉这个细胞不容易消化;而且传代对细胞形态影响很大;按照ATCC上推荐的冻存方法冻存的细胞,复苏是活的细胞非常少,难以复苏。
        我也遇到问题了啊
        问 rankl 与m-csf 价格贵不贵

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

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