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        质粒转入DE3感受态细胞中菌液PCR总是没有条带?

        相关实验:IPTG 诱导蛋白表达实验

        user-title

        dxy_fcz52av

        质粒转入DE3感受态细胞中菌液PCR总是没有条带?(质粒已经送测没有问题,大小约为1100bp,M2000)感受态细胞是商用感受态

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        4 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        这全是二聚体,一个可能是引物设计的不够好,另外一个是摇菌的时间要够,这样才能有模板pcr

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下几种原因:

        质粒转化效率低:转化的效率低可能导致在菌落PCR检测中出现假阴性结果。您可以尝试重新制备感受态细胞,注意细胞的生长状态和转化的时间等因素,确保转化效率足够高。

        质粒没有正确复制:感受态细胞内的大肠杆菌染色体和质粒的DNA竞争复制的情况下,质粒可能无法正常复制,导致质粒的拷贝数不足,PCR检测不出条带。您可以尝试使用一些复制更高效的质粒或增加抗生素筛选压力来提高质粒的复制数。

        PCR条件不当:可能是PCR反应中的一些因素导致检测不到目标DNA。您可以重新检查PCR反应条件,如引物浓度、反应体系的配比、PCR程序等,或尝试更改PCR反应体系的成分,如添加增稳剂或改变PCR缩合酶的品牌等。

        质粒被降解:在感受态细胞中,存在许多核酸酶和蛋白酶,可能会降解质粒DNA,导致PCR检测不到目标DNA。您可以尝试在感受态细胞中加入质粒保护剂,如EDTA或PMSF等。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        那可以增加质粒含量再测量,可能是质粒含量太低,达不到最低标准所以没有显示

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        可能是质粒没有转进去,或者是转进去了,是你的pcr引物不行。建议直接菌液送测序。

        user-title

        dxy_fcz52avuser-title

        每次送测都可以测通,会不会因为表达量不高导致后续蛋白实验失败呀

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