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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
为什么这个蛋白有两个条带
Eason老歌迷
很可能是该蛋白出现了同源二聚体,故都可以被抗体识别出来或者该蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗体结合另外抗体特异性不高,也会出现非特异性的结合,造成出现两条或者多条带。
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问
为什么circ RNA能与Ago2结合,就能说明能与miR结合啊?这不能说明它们之间是直接结合的吧
汤姆卜丽波
这个效果有点类似于coip,是ago2与miRNA结合,然后通过验证circ与ago的结合就可以知道circ和其他rna表达的关系,并不是说肯定他们结合
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问
免疫共沉淀实验能验证基因的什么特性?
土井挞克树
在免疫共沉淀中,由于其对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的蛋白替代。而这个蛋白的基因是已知的,所以可以推测靶蛋白的基因此外在免疫共沉淀的基础上,通过进一步与其它技术的结合,如聚丙烯酰胺凝胶电泳,进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定。
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问
同一条带曝光结果前后不一致
Eason老歌迷
同一张膜,本人可以在成像的时候,做出完全不同的图片结果。显色液的滴加,量,以及曝光时间,条带颜色(要求灰色而不是黑色)。所以最好有图片说明问题。
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问
为什么做COIP的时候 IP组会有多条条带?
此用户已注销
加入的A蛋白抗体和IgG 抗体,在最后一步的煮样中,被β巯基乙醇破坏了结构,变成了重链和轻链,随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同,又被你的B蛋白抗体识别出来,所以显影就出现了条带。
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问
文献里已知检测限0.5amol,如何计算转化成拷贝数/ml呢?
Eason老歌迷
计算公式为6.02 x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) ) / (DNA length x 660) = copies/ul。如果DNA/RNA的量是ng/ul,那么拷贝数(copies/ul)=[(ng数×10的-9次方)×(6.02×10的23次方)]÷(碱基数×345)例:3000 碱基质粒,浓度100 ng/ul ,MW= 3000 bp x 660 dalton/bp
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问
这个月一直跑western,一直出不来结果
此用户已注销
一、Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 :原因分析 解决办法 1. 一抗和二抗失效 1. 更换抗体;选择现用现配的工作液2. 2.一抗和二抗不匹配 2. 更换为同种同属的同亚型的抗体底物3. 3.发光液失效 3. 更换新的发光液4. 4.抗体染色不充分 4. 增加抗体浓度;延长孵育时间5. 5.被测样品中不含有目的蛋白质或者目的 蛋白质含量太低 5. 设置阳
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wb条带形状很奇怪,呈梭形或船形,请问该怎样解决呢?
申东熙老伯
梭形或船形可能是配胶没配均匀,也可能是样品盐浓度过高,电泳的时候可以先用10-15min用20V低电压跑十几分钟让盐分离。
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问
配胶有气泡
huarenqiang5
这种情况可能是凝胶过慢导致的,可以提高TEMED浓度,加入浓缩胶立即插梳子试试,
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问
请问大家有养间充质干细胞的吗?用什么血清啊
红嘴小花猫
Ultroser G 血清替代品是一种无血清添加剂,设计用于直接替代现有实验方案中的胎牛血清FBS
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问
蛋白免疫印迹,条带很细是怎么回事?
huarenqiang5
考虑是否是胶或抗体的浓度问题?
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问
条带没曝出来
申东熙老伯
分开曝光,一条一条曝,至少要看到趋势。
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问
代谢组学
此用户已注销
做这种代谢组学能纵向比较,比如不同发酵时间做代谢物的比较。还有样品的处理淬灭是取样后立马进行
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问
蛋白电泳完成去吃饭了,2h后回来才转膜,或者转膜完成,去干啥了回来才封闭。中间停留时间有没有影响?
Eason老歌迷
没啥太大影响。放那就行,别太长时间,我之前经常总这样。
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问
在污水处理时,如果用赤泥催化实验,那么赤泥中的其他有害物质该怎么处理才能尽量无害排放呢?
土井挞克树
赤泥可以用固硫剂CaO,可以做除硫剂,吸取烟雾中的SO2。形成的新物质酸碱中和,排放没有污染。
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问
COIP IgG组有明显的条带是怎么回事?
bamboopiggy
换另外一种二抗的IgG,是非特异性结合
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问
用BCA法测胶原蛋白浓度,562nm处的OD值很低,但是跑电泳有条带,这是正常现象吗?
balalaLy
有可能测OD值有误差,能跑出条带不就行了?
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问
冰冻切片HE染色
麻黄连翘赤小豆
可以,细胞核细胞质都染的明显能分辨,边界清晰
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问
小鼠活体成像结果怎么分析
Eason老歌迷
有特有的图像处理软件。比如说动物断层扫描仪(micro CT)进行IVIS活体成像系统荧光定量分析。
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问
求助|关于CB2R的wb实验条件
土井挞克树
这个还是与抗体有关,抗体的质量不够,联系抗体相关人员。
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