wb条带形状很奇怪，呈梭形或船形，请问该怎样解决呢？

这次跑出来的wb很奇怪，求教大家！

下图一是内参β-actin，上样量是20ug，最左侧泳道是空白组（未加刺激的细胞）。下图二是之前用细胞跑出来的结果，泳道从左到右上样量依次是10 15 35 50ug。

电泳和转膜条件都是一样的，电泳液和转膜液也都是新的。区别是一抗二抗是回收的，所以分别用了3次和2次。

我的问题是：

1. 为什么这次的形状这么奇怪，呈梭形？

2. 为什么这次已经上到了20ug，但是比之前的10 15ug的条带还细，处理组我还能接受，但是最左侧泳道是空白组，也是如此。

下面两张图是我的目标蛋白之一。图一是这次的，分组同上，最左侧是空白组，上样量是20ug。图二是之前的，分组同上，未加刺激的细胞蛋白，上样量是10 15 35 50ug。

这次的结果形状更不规则，有的是梭形，有的像覆船形？而且似乎有降解，下方还有隐约的条带。

请问大家认为可能是什么原因呢？是这一批蛋白制备有问题吗？

请大家不吝赐教！非常感谢！