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问
WB实验使用的膜哪种最好啊?
huarenqiang5
Pvdf膜跟nc膜有的区别及选择:一、硝酸纤维素NC膜的优点1.使用方便,操作简单,兼容多种检测方法,与 PVDF 膜相比,不需要甲醇浸泡过程,这样使得那 些需要亲水环境下的蛋白质转移。在转移前,仅需要在水中简单润湿,然后置于转移缓冲液中,不 需要其他的预湿步骤了。2. 背景低:除了具有高结合力外,硝酸纤维素膜本身产生的背景非常低,膜特有的表面性质保证了 优异的信噪比,在膜洗脱时不需要严格的洗脱条
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问
wb抗体和elisa抗体有什么不同要求?
sswei
一般来说用于 western 的抗体主要识别氨基酸序列特异性;而可用于 ELISA 的抗体则要看抗原种类,有些是识别氨基酸序列特异性,有些是识别构像特异性。所以一般根据抗体说明书来确定。做免疫印迹时选择抗体主要应考虑两个问题,一是所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白,另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。
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问
免疫沉淀实验中,如何判断抗体的亲和性和特异性,是否有其他实验可以用于确认结果?
sswei
抗体特异性验证的几种方法:1. 多抗体验证,2.基因敲除/敲降验证,3.天然差异对照验证,4.酶法检测验证
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问
ELISA实验中,怎样选择最佳的包被抗原浓度以获得最高的灵敏度和特异性?
龙大人驾到
1. 初始的抗原包被浓度可以根据文献或前人经验进行初步选择。2. 进行一系列抗原包被浓度的实验,产生一组数据,以评估不同浓度下的ELISA信号,并确定最佳浓度。3. 可以通过稀释抗原溶液来获得不同的抗原包被浓度。例如,对于包含1mg/ml抗原的溶液,可以通过将其与缓冲液按比例混合并逐步稀释到0.1mg/ml、0.01mg/ml等浓度。4. 对于每种稀释物,与一定数量的特异性抗体进行结合。结合后,可
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问
Elisa结果不是特别好,老板让做elispot.有详细的步骤么有大佬做过么,要注意什么
huarenqiang5
直接间接法刺激方法:建议用PMA和娄诺霉素刺激PBMC,使其产生IFNγ。在培养液中稀释PBMC,其中含1ng/ml PMA和500ng/ml娄诺霉素(Sigma, Saint Louis, MO)。加5X104至3x105个细胞到抗体包被的PVDF孔,孵育箱中孵育10-15小时。其它的刺激剂孵育时间可能不同,基于细胞因子生成细胞的量,按不同情况作最佳选择。操作过程1. 用50ul 70%酒精孵育
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问
原核表达IPTG诱导问题求助
sswei
反应条件较复杂,特别是对自己设计的引物来说,选择合适的退火温度,是需要慢慢摸索的,一般根据计算的退火温度降低5~10℃来进行首次扩增,如果出现了目的条带,且有杂带时,在逐步提高退火温度,以提高反应的特异性。此外,还有反应体系,电泳条件,时间等等因素。
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问
请问各位大神nrf2 蛋白wb怎么跑?
豆豆是个豆
我是用12%的胶跑的,转膜、封闭、孵二抗都是两个小时,然后洗的时候不要洗那么多次,三次,每次5min就够了,不然会洗掉。nrf2本身蛋白量67,但是做WB通常是检测100KD的条带(此时nrf2可能有和其他蛋白结合),而且同一泳道nrf2通常会分裂好几条条带。
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问
求助大家:PBMC可以诱导分化pDc吗,该如何做呢,请各位大神指教
龙大人驾到
PBMC可以诱导分化成pDC。以下是一种常用的方法:1. PBMC提取:从新鲜采集的人类全血中提取PBMC,方法包括梯度离心、红细胞淋巴细胞分离液等。2. 培养PBMC:将PBMC在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养5天以获得生长迅速的DC。3. 刺激分化:将培养的DC在缺乏血清的培养基中刺激24小时,通常使用CpG DNA进行刺激,也可使用病毒、细菌等免疫刺激物。4. 分化pDC:将刺激过
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问
snail泛素化
dxy_xextz7w2
检测泛素化不是检测特定的条带,泛素化的范围广因此要检测整个蛋白泳道的
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问
Elisa洗板子的时候如果没有PBST可以用PBS代替么,吐温的作用是什么
土井挞克树
可以用pbs多冲洗几次,吐温主要是表面活性剂
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问
LPS诱导细胞炎症促进防御素表达
汤姆卜丽波
可以分析你的测序结果啊,看看不同浓度诱导的表达有什么差异
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问
为什么跑蛋白,STAT3含量基本不变?
龙大人驾到
这是因为STAT3与p-STAT3的含义不同。STAT3是一种蛋白质,其含量在治疗前后基本不变。而p-STAT3是一种磷酸化修饰形式的STAT3,其含量会随着外界信号刺激而发生变化。当外界信号刺激到细胞时,激活的激酶会磷酸化STAT3,将其转化为p-STAT3,p-STAT3进入细胞核后调控相关基因的转录。因此,检测STAT3和p-STAT3可以了解到外界信号刺激是否引起了STAT3的磷酸化修饰。
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问
这个是什么原因啊?是转膜温度太高了吗?但是并不是特别热啊 只是稍微热一点点🤏
秋秋欣欣
也可能是蛋白的问题,有点弥散。
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问
万能的网友们!为啥跑WB的时候,样品会漏到玻璃板之间的空隙内啊😭😭😭😭
秋秋欣欣
这很明显就是胶的问题了,重新配胶看看
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问
wb实验,浓缩胶30min,分离胶40min,浓缩胶跑到25min的时候,一直有拖尾,不知道是为什么,我的上样量是40μl
huarenqiang5
考虑以下原因:蛋白量太大、一抗浓度和时间太长、样品溶解不好。
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问
热蛋白组学TPP/CETSA方法,在提取细胞裂解物的时候,为什么用的是冻融法,而不是用表面活性剂
loveliufudan
这是因为在热蛋白组学实验中,使用表面活性剂(如Triton X-100)会破坏细胞膜,导致蛋白质的热稳定性发生改变,进而影响实验结果的准确性。此外,表面活性剂还可能影响到蛋白质与小分子药物的相互作用。相比之下,冻融法可以在不破坏细胞膜的情况下释放细胞内的蛋白质,并且有助于保持蛋白质的天然构象。因此,冻融法在热蛋白组学TPP/CETSA方法中被广泛采用。
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问
ELISA实验标准曲线相关
juyue2010
个别出现偏差,可能是加样的问题,去掉即可。或重新检测
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问
硫酸铵沉淀蛋白是加配制好相应饱和度的溶液还是直接直接加固体
loveliufudan
如果你想沉淀蛋白质,你需要先配制好相应饱和度的硫酸铵溶液,然后慢慢加入到蛋白质溶液中,并不断搅拌均匀。直接加固体硫酸铵可能会导致局部过饱和或者不均匀,影响沉淀效果。
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问
wb实验同样的操作条件和试剂,蛋白条带完全不一样,一个非常清晰一个几乎无条带,是一抗不行了吗?
balalaLy
抗体孵育时间,还有TBST的ph值也是会有影响的
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问
western转膜之后,封闭之前要不要洗膜?还是转完之后直接放在封闭液里?
juyue2010
需要用PBST清洗一下,洗掉转膜缓冲液
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