wb实验同样的操作条件和试剂，蛋白条带完全不一样，一个非常清晰一个几乎无条带，是一抗不行了吗？

抗体孵育时间，还有TBST的ph值也是会有影响的

有可能是另外一张膜转膜时出了问题

以下是可能的原因：

一抗或二抗过期或失活，建议更换新的抗体或检查保存条件。

一抗或二抗浓度过低或过高，建议调整浓度或进行稀释曲线实验。

膜上蛋白量过低或过高，建议调整上样量或进行质量控制实验。

转膜不充分或转膜时间过长，建议优化转膜条件或更换新的转膜仪器。

显色时间不足或过长，建议控制显色时间或更换新的显色试剂。

原因有很多，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。

首先考虑肯定是抗体的问题，抗体失效或者太少都是不可以的