这个是什么原因啊？是转膜温度太高了吗？但是并不是特别热啊 只是稍微热一点点🤏

也可能是蛋白的问题，有点弥散。

原因一个是可能需要优化用的膜的参数和转膜的电泳条件（恒压还是恒流，电泳时间，Western转膜液含量）。一个是温度问题（是否保持低温）。

你这个主要考虑以下几点：

1.是否转膜电压过高；转膜中是否有气泡残留；转膜缓冲液组分问题。 解决办法：降低转膜电压，重新配制缓冲液，在电转之前小心的移除膜和胶之间的气泡

2.可能孵育时振荡不均匀，抗体和封闭液不结合。 解决办法：离心，分离二抗中的聚合体，确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中；孵育时确保震荡均匀，尝试更换封闭液分离胶聚合不均匀，导致蛋白电泳不一致：调整聚合条件，分离胶溶液混匀后再进行聚合。

抗体特异性差，抗体孵化的时间太长了

如果转膜温度不是太高，那么这种情况有可能是以下几种原因导致的：

蛋白质电泳不够彻底：在电泳时需要确保电泳时间足够长，以确保蛋白质能够彻底分离。

过度转移或不足转移：如果转膜时间太长或电流电压过高，可能会导致蛋白质过度转移到膜上，从而使条带模糊不清。相反，如果转膜时间太短或电流电压过低，则会导致蛋白质无法完全转移到膜上。

蛋白质浓度过高或过低：如果蛋白质浓度过高，则会导致条带变宽或出现多个带，从而使结果不清晰。相反，如果蛋白质浓度过低，则会导致条带弱或者看不到。

组织或细胞的不均匀性：如果细胞或组织的数量和蛋白质含量不同，可能会导致条带宽度不一致或者出现多个带，从而影响结果的准确性。

蛋白质电泳缓冲液pH值不正确：蛋白质电泳缓冲液的pH值对电泳的结果有很大影响。如果pH值不正确，可能会导致条带模糊或者不清晰。

如果您排除了以上原因，您可以尝试调整Western Blotting的实验条件，比如调整电泳缓冲液的pH值、转膜时间、电流电压、蛋白质浓度等。如果问题仍然存在，您可以考虑尝试其他实验方法来验证您的结果。

这个结果可以将三明治结构做的紧实一些，