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实验问答23,457,018 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问可细胞内溶蛋白和不可溶蛋白如何分离？

dxy_9njnv24q

请问有成熟的protocol可以分享吗？我也困惑中

4 回答3414 围观

问目的条带有被拉下来但是重新把膜洗了然后敷另一个对照抗体，ip就没有😭会是什么问题呀

loveliufudan

目的条带被拉下来可能是由于膜的处理、处理时间、电泳条件等因素导致的。重新将膜洗一遍可以去除非特异性的结合，但如果之前处理膜的步骤不正确，则可能仍然会影响结果。对照抗体能够成功进行IP说明IP反应本身没有问题，但仍需要对之前目的抗体的IP反应进行分析，可能的问题包括：目的抗体的选择是否正确：如果目的抗体不特异，则可能会出现假阳性的结果或者非特异性的结合，导致目的条带的拉下或者不明显。在选择目的抗体时

4 回答296 围观

问对分泌蛋白进行检测除了elisa 蛋白免疫印记还可以用什么？

土井挞克树

还可以做wb实验，免疫荧光化学等实验

4 回答1022 围观

问抗体为什么敷完之后底板老出现黑乎乎的一团

土井挞克树

抗体浓度过大或者孵育时间太长就会黑乎乎一团

4 回答235 围观

问请问做WB时出现这种情况是什么原因

申东熙老伯

样品浓度过高loading跑不下去，可以多加点loading稀释一下。

4 回答336 围观

问朋友们！我的内参为啥跑成这个鬼样子啊，上样前看见样品孔里有一点凝胶碎屑，跟这个有关系嘛？

土井挞克树

有一定关系，凝胶孔压的杂质会污染内参，影响内参的成像

4 回答363 围观

问免疫沉淀实验干扰的排除方法？

loveliufudan

在免疫沉淀实验中，有时候靶蛋白的大小与重链或轻链相近，会影响靶蛋白的检测。针对这种情况，有一些方法可以尝试：使用预先交叉吸附（Pre-Clearing）：在进行免疫沉淀之前，先用抗体（不是用于靶蛋白的抗体）与细胞裂解物进行结合，通过离心将这些抗体结合的蛋白质沉淀掉。这样可以减少重链和轻链的干扰，提高靶蛋白的检测灵敏度。选择性减少重链或轻链的信号：使用特异性抗体或是特异性减少重链或轻链信号的方法。例

4 回答510 围观

问NM23-H1 会同时在肿瘤细胞内起到抑制肿瘤转移的作用，分泌到细胞外促进肿瘤的转移的作用吗？

huarenqiang5

可以在肿瘤细胞内抑制肿瘤转移作用的同时起到分泌到细胞外促进肿瘤的转移作用。

3 回答438 围观

问mtor2信号通路要怎么研究？具体研究哪几个关键蛋白比较好呢？

huarenqiang5

研究DEPTOR，mSLT8（GβL）蛋白比较好。

4 回答367 围观

问ELISA实验中二抗用Fab还是Fc片段，如何选择？

huarenqiang5

Fab段包含完整的可变区，以及恒定区的CH1区域。 Fc段仅指Ig恒定区CH2和CH3的区域，相当于Y字结构下面那一部分。建议二抗用Fc片段，减少降解片段的干扰。

4 回答1421 围观

问抗原包板的ELISA用于检测血样中抗体效价，OD值要如何进行分析？

sswei

OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。最需要注意的就是测量时的光波长。上文在介绍“OD值”概念时

2 回答2109 围观

问基础医学科研小白如何写实验设计呀？

sswei

实验设计的最重要的三个要素是研究目的、研究假设和研究方法。这三个要素决定了研究的成果，是完成科学研究的基础。实验设计总共有四个基本原则，它们分别是：1、对照原则；2、实验条件一致性原则；3、随机化原则；4、重复性原则。实验设计的基本方法一、明确实验目的实验目的是实验设计的出发点，要明确对象、范围和研究目的。二、作出假设（实验目的的具体化）假设是实验设计的关键步骤，实验设计就是要根据假设去寻

3 回答592 围观

问免疫沉淀实验，电泳后考染/银染，BSA粉末是否有背景干扰

土井挞克树

会有背景干扰，粉末有时候溶解不足就会产生背景干扰

3 回答407 围观

问重链曝不出来目的条带却能曝出来

土井挞克树

可能的原因有 3 个： 1）一抗效价不好。 2）抗原太稀。 3）封闭时间过长。解决的方法： 1）换用一抗或增加一抗用量。 2）增加抗原浓度。 3）缩短封闭时间，封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时，或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。

3 回答304 围观

问蛋白免疫印记实验中，无蛋白的区域具有高背景，洗涤非常充分，孵化温度也比较合适，会是什么原因

土井挞克树

可能是封闭液的原因，封闭液的浓度偏低，封闭时间过短，导致封闭不彻底，抗体与酶标板孔结合，也可能导致无蛋白区域背景偏高。

3 回答292 围观

问Elisa实验结果白板，对照不显色，咋办呀？

huarenqiang5

考虑以下几点原因：1.将终止液当做底物或者酶结合物使用2.洗涤液桶受到污染，有YZ酶活性的物质存在或者蒸馏水受到污染。

3 回答645 围观

问Elisa实验中，结果空白背景高，一般是什么原因？

huarenqiang5

常见原因如下：1）洗板不干净；2）显色液变质或者试剂过期；3）试剂稀释有误，如加酶的浓度过高；4）蒸馏水受酶等污染；5）试剂混用；6）培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

3 回答1385 围观

问想问一下大佬们，我要测一个放线菌的分泌蛋白的表达量，

sswei

可以采用散射比浊法来测定分泌蛋白的量。

3 回答490 围观

问在测量多糖中蛋白质含量时，是否可以使用BCA测量，对比使用Bradford法哪种方法更适合，为什么？

loveliufudan

BCA和Bradford法都是常用的蛋白质测量方法，但是它们对多糖的干扰程度不同。通常情况下，多糖会干扰Bradford法的测量，导致高估蛋白质含量。而BCA法对多糖的干扰相对较小，更适合测量多糖中蛋白质的含量。因此，如果需要测量多糖中蛋白质的含量，建议选择BCA法进行测量。但是，如果待测样品中没有多糖的干扰，Bradford法也可以使用。需要根据具体情况选择合适的方法。

3 回答1589 围观

问western blot免疫印迹实验，目的带很弱，要怎么加强

土井挞克树

增强上样浓度和上样量，延长一抗孵育时间

3 回答610 围观

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