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科研学霸天团，48小时有问必答

问热蛋白组学实验裂解细胞，可以用Rapigest SF吗？

土井挞克树

裂解剂一般还是要选择NP-40，Rapigest SF注意作用是表面活性剂，增强表面活性

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问小鼠免疫相关问题求教

洛噜啦噜啦嘞

首先，细胞免疫效果取决于抗原。正常情况下皮下接种，背部皮下即可。接种成功，其实，我们看的是一段时间之后，接种位置处是否出现溃烂，即表明有炎症产生，当然，并不是所有的免疫接种都会出现这种情况。

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问细胞孵育完IgG抗体会影响后续加药吗

sswei

可能存在抗体不识別或抗体选择错误等情况。

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问胶乳增强免疫比浊试剂稳定性的相关问题

土井挞克树

先把沉淀去除，用上清液再观察七天。

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问WB条带很丑，而且还是皱眉条带?

土井挞克树

蛋白的浓度太大，而且ph也需要调节

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问请问WB检测培养基里面分泌蛋白的表达量，可以用什么内参？

土井挞克树

可以用actin做内参，比较稳定

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问提细胞蛋白，裂解离心之后，离心管里的沉淀是什么？

loveliufudan

在细胞裂解和离心的过程中，离心管里的沉淀可能是细胞的细胞器、膜片段、细胞骨架等细胞内结构，以及细胞中的蛋白质、核酸等生物大分子。具体来说，如果你是提取全细胞蛋白，则沉淀中会含有细胞核、线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器以及膜片段、细胞骨架等细胞内结构。同时，还会含有细胞中的蛋白质、核酸等生物大分子。如果你是提取特定的蛋白质，则沉淀中只会含有该蛋白质所在的细胞器、结构或特定的蛋白质。需要注意的

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问可细胞内溶蛋白和不可溶蛋白如何分离？

dxy_9njnv24q

请问有成熟的protocol可以分享吗？我也困惑中

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问目的条带有被拉下来但是重新把膜洗了然后敷另一个对照抗体，ip就没有😭会是什么问题呀

loveliufudan

目的条带被拉下来可能是由于膜的处理、处理时间、电泳条件等因素导致的。重新将膜洗一遍可以去除非特异性的结合，但如果之前处理膜的步骤不正确，则可能仍然会影响结果。对照抗体能够成功进行IP说明IP反应本身没有问题，但仍需要对之前目的抗体的IP反应进行分析，可能的问题包括：目的抗体的选择是否正确：如果目的抗体不特异，则可能会出现假阳性的结果或者非特异性的结合，导致目的条带的拉下或者不明显。在选择目的抗体时

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问对分泌蛋白进行检测除了elisa 蛋白免疫印记还可以用什么？

土井挞克树

还可以做wb实验，免疫荧光化学等实验

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问抗体为什么敷完之后底板老出现黑乎乎的一团

土井挞克树

抗体浓度过大或者孵育时间太长就会黑乎乎一团

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问请问做WB时出现这种情况是什么原因

申东熙老伯

样品浓度过高loading跑不下去，可以多加点loading稀释一下。

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问朋友们！我的内参为啥跑成这个鬼样子啊，上样前看见样品孔里有一点凝胶碎屑，跟这个有关系嘛？

土井挞克树

有一定关系，凝胶孔压的杂质会污染内参，影响内参的成像

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问免疫沉淀实验干扰的排除方法？

loveliufudan

在免疫沉淀实验中，有时候靶蛋白的大小与重链或轻链相近，会影响靶蛋白的检测。针对这种情况，有一些方法可以尝试：使用预先交叉吸附（Pre-Clearing）：在进行免疫沉淀之前，先用抗体（不是用于靶蛋白的抗体）与细胞裂解物进行结合，通过离心将这些抗体结合的蛋白质沉淀掉。这样可以减少重链和轻链的干扰，提高靶蛋白的检测灵敏度。选择性减少重链或轻链的信号：使用特异性抗体或是特异性减少重链或轻链信号的方法。例

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问NM23-H1 会同时在肿瘤细胞内起到抑制肿瘤转移的作用，分泌到细胞外促进肿瘤的转移的作用吗？

huarenqiang5

可以在肿瘤细胞内抑制肿瘤转移作用的同时起到分泌到细胞外促进肿瘤的转移作用。

3 回答430 围观

问mtor2信号通路要怎么研究？具体研究哪几个关键蛋白比较好呢？

huarenqiang5

研究DEPTOR，mSLT8（GβL）蛋白比较好。

4 回答346 围观

问ELISA实验中二抗用Fab还是Fc片段，如何选择？

huarenqiang5

Fab段包含完整的可变区，以及恒定区的CH1区域。 Fc段仅指Ig恒定区CH2和CH3的区域，相当于Y字结构下面那一部分。建议二抗用Fc片段，减少降解片段的干扰。

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问抗原包板的ELISA用于检测血样中抗体效价，OD值要如何进行分析？

sswei

OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。最需要注意的就是测量时的光波长。上文在介绍“OD值”概念时

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问基础医学科研小白如何写实验设计呀？

sswei

实验设计的最重要的三个要素是研究目的、研究假设和研究方法。这三个要素决定了研究的成果，是完成科学研究的基础。实验设计总共有四个基本原则，它们分别是：1、对照原则；2、实验条件一致性原则；3、随机化原则；4、重复性原则。实验设计的基本方法一、明确实验目的实验目的是实验设计的出发点，要明确对象、范围和研究目的。二、作出假设（实验目的的具体化）假设是实验设计的关键步骤，实验设计就是要根据假设去寻

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问免疫沉淀实验，电泳后考染/银染，BSA粉末是否有背景干扰

土井挞克树

会有背景干扰，粉末有时候溶解不足就会产生背景干扰

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