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        重链曝不出来目的条带却能曝出来

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        绿茵不减来时路

        做Co-IP,IgG的条带做了两次都没有曝出来,但是目的基因的条带能曝出来,不知道原因出在哪

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        3 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可能的原因有 3 个: 1)一抗效价不好。 2)抗原太稀。 3)封闭时间过长。

        解决的方法: 1)换用一抗或增加一抗用量。 2)增加抗原浓度。 3)缩短封闭时间,封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时,或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。

        user-title

        sswei

        有帮助

        原因可能是没洗干净,如果是这个原因,随便再用几种其它抗体,也能检测到类似条带。

        也可能是目的蛋白可以与IgG或珠子非特异性结合,可以考虑改一改实验设计,一个转空载质粒、一个转FLAG融合蛋白,都用anti-FLAG抗体做Co-IP,就不需要再用IgG。当然,此方法也未必能完全解决问题。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        在 Co-IP 中,抗体的质量是影响实验成功的一个重要因素。在您的实验中,如果目的基因的条带能曝出来,这表明蛋白质的结合和免疫印迹的过程可能是正确的。因此,问题可能出在您使用的抗体上。

        首先,检查您使用的 lgG 抗体是否经过有效的验证,确保其可以特异性地结合到目标蛋白。其次,确保使用的抗体浓度和孵育时间都是合适的。如果您的 lgG 抗体浓度过低或孵育时间太短,那么它可能无法充分结合目标蛋白,从而导致没有条带出现。此外,您也可以尝试优化 Co-IP 的实验条件,例如缓冲液的成分和浓度、孵育温度和时间等。

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