可细胞内溶蛋白和不可溶蛋白如何分离？

请问有成熟的protocol可以分享吗？我也困惑中

通过差速离心等方法分离细胞核或相应细胞器。在细胞破碎时加入缓冲液进行抽提，将目的蛋白溶出，同时保持合适的pH和离子强度。一般可溶蛋白用稀盐提取，脂蛋白可用稀SDS或有机溶剂抽提，不溶蛋白用稀碱处理。

可溶蛋白的提取是研磨，用的缓冲液是PBS（含PIC),然后超声波（20s, 4次）。离心后的上清作为可溶蛋白的代表。pellet用加了1%SDS的PBS中作用30min,离心后的上清作为不溶蛋白的代表。

将细胞裂解后，细胞蛋白质可以分为可溶性蛋白和不可溶性蛋白。下面是一种常用的方法，以分离细胞中的可溶性蛋白和不可溶性蛋白：

步骤：

用 PBS 等缓冲液洗涤细胞；

加入适量的 RIPA 缓冲液（含有 Triton X-100，SDS，甘氨酸等成分），裂解细胞膜并释放蛋白质；

离心裂解后的细胞悬液，分离上清液和沉淀物；

上清液中的蛋白质为可溶性蛋白，而沉淀物中的蛋白质为不可溶性蛋白。

注意事项：

蛋白裂解缓冲液的配方需根据实验需要进行优化，如选择不同种类和浓度的离子表面活性剂，或添加蛋白酶抑制剂等；

在裂解细胞时，需要注意裂解时间和裂解温度，避免过度裂解或热变性；

离心时需要注意离心速度和离心时间，以充分分离上清液和沉淀物；

不同细胞类型和不同实验目的，裂解条件和分离方法可能需要进行优化和调整。