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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
有没有做个磷酸化的大神遇到过这种情况呢?只出来两三个组,同一批蛋白同个牌子的一抗,另一个指标能出来,这个指标只能出来一俩个组
z流沙z
首先有存在条带,证明整个实验基本上没有问题。至于条带弱或者有的没有条带,有可能是刺激因素不够导致蛋白没有发生磷酸化,也有可能是蛋白上样量不够导致没有显现出来,因为看着背景也比较脏,可以增加上样量和抗体浓度,注意用BSA封闭
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问
奇怪的wb。
loveliufudan
这种结果可能是由于交叉反应引起的。可能存在某种共同的表位或蛋白质结构,使得一些抗体可以结合到多个不同的分子上。在这种情况下,一些不特异的交叉反应可能会发生,导致一些意外的结果。对于您所描述的情况,一抗可能存在少量的别的抗体,这些抗体可能与actin结合,从而导致actin的信号出现。当使用正确的二抗时,这些交叉反应可能会被抵消,因此actin的信号可能会消失,而目的蛋白的信号会显示。需要进一步注意
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问
ELISA
z流沙z
不一定,看读值大不大,有时候可能只是一些非特异性的背景
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问
蛋白质与糖学
z流沙z
纯化的目的是提纯,过程中会有损失,如果还有浓缩的话可能量会增多
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问
怎么看免疫共沉淀的图,求助
z流沙z
lysate就是相当于普通wb,检测在细胞中转染过表达的所有蛋白是否表达,然后加入珠子和相应抗体进行富集IP,看看目的蛋白和靶蛋白之间是否相互作用,或者目的蛋白是否影响靶蛋白的泛素化水平。图中的一片smear就是泛素化条带
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问
WB条带不整齐,背景很脏,条带在上方想没跑下来一样
有才华的小学生
转膜条件不对?转印电极芯坏了?封闭液没有配对?显影液不新鲜?没加均匀?先染胶排除蛋白和电泳问题。再看转膜 封闭 抗体问题。
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问
wb统计方法
z流沙z
不能进行数据挑选,要每个样品每个组别
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问
WB:求问ZO-1蛋白,具体电泳转膜条件怎么设定呀?
土井挞克树
1.推荐使用8%浓度的分离胶进行电泳。2.建议使用阳性对照。 3.建议在转膜缓冲液中加入SDS至终浓度为0.1%。 4. 建议使用0.45μm的PVDF膜。 5. 建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。 6.建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。
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问
wb条带灰度分析的数据处理
z流沙z
单次实验的对照组设为1,同次实验的实验组以及不同批次实验的对照组和实验组都以这个对照组来进行归一化就ok了
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问
求助,抗体混了甘油后还可以进行辣根酶标记吗
土井挞克树
可以的,纯化后可以进行辣根酶标记。
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问
回收试验
z流沙z
细菌在培养基中能否繁殖,从而扩增质粒,质粒加到培养基中是没有效果的
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问
WB条带
土井挞克树
可能是目的蛋白存在降解,所以会有多个条带
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问
请教胎牛血清空陪问题
土井挞克树
看着像是细菌污染,可以再观察看看。
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问
使用survival roc做时间依赖的ROC曲线,发现保护因素的AUC都小于0.5.
土井挞克树
你可以做个多因素回归分析,看各因素是否都有统计学意义,然后把没有意义的排除
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问
糖化血红蛋白的值能否直接用干预后的均数减去干预前 得到糖化血红蛋白变化值
土井挞克树
如果是均数相减可能会增加误差,应该相减后求均数
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问
有序多分类的KM曲线有交叉,还可以纳入多因素Cox吗?
土井挞克树
有序多分类的KM曲线有交叉,也是可以纳入多因素Cox的,但是需要注意异质性
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问
wb显影条带一片黑是怎么回事
loveliufudan
可能是由于过度显影或者过度曝光导致的。过度显影会导致条带变得过于浓厚,出现全黑的现象。建议在下一次实验中缩短显影时间或减少曝光时间,逐步优化显影条件,以得到理想的条带。
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问
岛津液相自动进样器进样前后,清洗时有液滴溢出,会影响样品出峰吗
sswei
液滴溢出量少,不会影响样品出峰。
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问
为什么做WB实验时目的蛋白位点会严重偏移,例如36位点的Gapdh有时会在30左右的位点?
相似又互补
会不会你用的marker不行,换一个别的品牌marker试试看
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问
Wb跑胶下层跑歪了怎么回事
sswei
可能存在胶没有配好,有气泡,界面不平等情况。
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