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        wb条带目的蛋白下面一片黑

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        一世丶K7BV

        上面是目的蛋白,下面是内参,跑了几次都是黑成一片,(一抗稀释1:50000),二抗(1:10000)。一抗浓度还是太高了么图片描述图片描述

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        4 个回答

        user-title

        求求不要翻车啦

        有帮助

        可能是封闭时间比较短,洗膜没洗干净,一抗浓度适当降低,等等

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        曝光时间再缩短一些,增加洗膜buffer中土温20的量

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        黑色条带通常是由于过多的蛋白负荷或者过高的一抗浓度引起的。建议你尝试以下几个步骤来解决这个问题:

        降低一抗浓度:如果一抗浓度太高,会导致蛋白负荷过多,从而使得下方的内参带变得模糊或黑色。尝试降低一抗浓度,比如从1:50000调整到1:100000,然后再进行免疫印迹实验。

        调整二抗浓度:如果一抗浓度已经很低了,那么尝试调整二抗浓度,比如从1:10000调整到1:5000。

        调整蛋白负荷量:尝试加载更少的蛋白负荷量。如果你已经在减少一抗浓度和二抗浓度后仍然看到黑色条带,那么可能是因为你加载的蛋白负荷太多了,导致下面的内参带变得模糊或黑色。

        检查免疫印迹仪器:如果以上措施都没有解决问题,那么检查一下你使用的免疫印迹仪器是否正常。比如检查电流是否稳定,是否有漏电等情况。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        一抗浓度太高或孵育时间太长,降低浓度和孵育时间

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