WB：求问ZO-1蛋白，具体电泳转膜条件怎么设定呀？

以下是一些可能有用的电泳转膜条件设置建议：

电泳条件：

针对您的样品特点，建议您尝试10%或12%的SDS-PAGE凝胶电泳分离，如果您的样品数量有限，可以使用1D电泳。电泳过程中，保持电流密度在20 mA/gel左右，使得样品能够充分分离。

转膜条件：

您可以根据您的样品特性和实验需求，尝试以下两种转膜条件：

Wet transfer：

在常规缓冲液中，使用常规的SDS转移缓冲液（例如Tris-Glycine缓冲液），pH设为8.3左右，电流密度为0.1-0.2mA/cm2，时间为1小时至过夜不等。建议在转膜前将膜预先孵育在转移缓冲液中，以保证膜的完全湿润。

Semi-dry transfer：

该方法使用缓冲液量较少，转移速度更快，且需要较少的电流。在该方法中，您可以尝试将电流密度设为0.8-1.0mA/cm2，时间为15-30分钟不等。由于转膜速度较快，建议您根据实验结果进行优化。

在转膜过程中，可以通过Ponceau S染色来验证转膜效果，以确保目标蛋白已成功转移到膜上。

1.推荐使用8%浓度的分离胶进行电泳。

2.建议使用阳性对照。

3.建议在转膜缓冲液中加入SDS至终浓度为0.1%。

4. 建议使用0.45μm的PVDF膜。

5. 建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。

6.建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。

可以试一下用1.0的板，7%的胶来跑，转膜用90V 4小时