WB条带不整齐，背景很脏，条带在上方想没跑下来一样
实验小白的小蓝
各位大佬们好，我近期再收蛋白样，跑WB，但一直背景不干净，目的条带不整齐，不清楚，模模糊糊，似有似无，并且我的条带在下面，但最上方一直很黑，想没有跑下来一样，跑了好多遍都是这样，想问问到底是我WB操作有问题，还是收样有问题，麻烦各位大佬帮忙一下。
3 个回答
有才华的小学生
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转膜条件不对？转印电极芯坏了？
封闭液没有配对？
显影液不新鲜？没加均匀？
先染胶排除蛋白和电泳问题。再看转膜 封闭 抗体问题。
loveliufudan
有帮助
可能有以下几个原因：
蛋白质收样不纯或者含量不足：建议使用较高纯度的蛋白质样品进行Western blotting，或者尝试使用更多的样品以增加蛋白质的含量。
蛋白质电泳时，载样量不均匀或者载体不够平整：建议载体上加样均匀，载体平整，不要载入过多的样品以防止出现横向扩散的情况。
蛋白质电泳不充分：建议延长电泳时间，以确保蛋白质完全分离。
蛋白质转膜不充分：建议使用正确的转膜条件，包括Western转膜液的配制和转膜时间等。
第一次抗体浓度过低或过高：建议优化第一次抗体浓度，建议根据不同抗体调整抗体浓度。
土井挞克树
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背景太脏了，更换特异度高的抗体
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