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科研学霸天团,48小时有问必答
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土井挞克树
电压一般设置110V,其他也是可以的,一般85~150V都问题不大,电压太大速度快但会产热大,电压太小速度太慢。可以让蓝色上样缓冲跑出来后,再跑上20min;大分子建议延长电泳时间。
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求助WB,marker处出现了蛋白
balalaLy
前面一组的marker上那个亮点看着像是杂质
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蛋白上样缓冲液求助
balalaLy
解冻后分装就好了,不需要添加DTT.影响不大的。
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问
phosphorylated CD3Z WB检测
balalaLy
18kDa跟20kDa的位置很接近,是对的。那个60几的是重组蛋白,不是单纯的CD3Z
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问
抑制mTOR对pAkt的影响
土井挞克树
rapamycin抑制mTOR后对pAkt表达有双重作用,表现为抑制和促进的双调整,考虑是此浓度下对pakt有抑制作用
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问
wb无条带求助
balalaLy
一般内参抗体很少出问题,内参不出条带可能是位置不对,或者二抗种属不对。其次,抗体孵育使用的buffer,比如抗体稀释液或者TBST的 ph过高。
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Huvec加了erastin没作用
huarenqiang5
rsl3诱导效果相对来说要稳定些。
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问
hela细胞诱导脂滴生成
huarenqiang5
你这个没事,对实验结果没什么影响。
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问
求助|THP-1被诱导成为M1,M2巨噬细胞后如何才能消化下来啊
loveliufudan
消化THP-1细胞以获得单细胞悬浮液是一个具有挑战性的过程。试试下面的方法可能会有所帮助:1. 增加消化时间:有时候,消化时间可能需要更长。您可以尝试将消化时间延长到1小时或更长时间,以确保细胞完全消化。2. 提高消化温度:将消化温度提高到37°C可能有助于提高消化效果。请确保细胞在一个温度控制良好的环境中进行消化。3. 试用其他消化酶:除了Trypsin-EDTA外,还有其他消化酶可以用于消化细
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WB电泳求助,条带直接炸裂
huarenqiang5
考虑是电泳速度过快或电泳时温度过高或电压过高导致。
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问
CO ip实验中A蛋白拉B蛋白能行,但是B拉不出A是什么原因?
balalaLy
那可能是B抗体的问题,抗原抗体结合力弱
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老师们好,WB实验遇到这种问题是什么回事呀?感觉不是单一问题,为什么会出现这种情况呢?怎么处理呢?
yoloDP4U
可以更换新的电泳液,loading buffer也可以换新的
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问
老师们好,请问WB电泳液转膜液用太久了对结果有影响吗?原理是什么呀?
balalaLy
一般用过4、5次是没有问题的,用太多次会引入许多杂质,影响电流。
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问
求助 Raw265.7细胞CD86单阳性
huarenqiang5
主要是因为它们的基因编码不同,CD80和CD86(601020)基因分别编码B7-1和B7-2。
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问
高糖诱导细胞损伤,如何设置等渗对照组
loveliufudan
确定甘露醇添加量的一种常用方法是根据渗透压平衡原理来计算。在这种情况下,你希望甘露醇与高糖组具有相同的渗透压,以便能够作为等渗对照组。渗透压可以通过浓度来近似计算,使用Van't Hoff公式:渗透压 = 浓度 × 体积 × 摩尔折射系数(常数)。具体计算甘露醇添加量的步骤如下:1. 确定高糖组的浓度,如35 mM。2. 找到甘露醇的摩尔折射系数。可以在相关文献、化学手册或实验室常用的数据库中查找
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问
类囊体膜提取
loveliufudan
丙酮(丙酮酮或丙二酮)是一种有机溶剂,通常是无色液体。它在常温下具有较低的溶解度,约为24.7克/100毫升。这就是为什么丙酮不易溶于水的原因。如果你想配制80%的丙酮溶液,可以考虑使用以下步骤:1. 准备测量容器:选择一个容量合适的容器来配制溶液。确保容器干净且无污染。2. 加入丙酮:将所需的丙酮量慢慢倒入容器中。请注意,丙酮具有挥发性,所以在操作时要小心避免丙酮的散失。3. 加入水:向容器中加
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老师们好,我想保存WB结果比较好的膜,可以之后再显影看结果那种,请问有法子吗?能保存多久呢?
土井挞克树
保存膜可以浸泡在PBS或TBS中,4度放置。一般能保存一周左右
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我只上了两个maker,这其他的是咋来的啊
汤姆卜丽波
拔梳子的时候可能太用力了,你的胶孔在漏
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问
WB条带呈现出笑脸样条带是怎么回事?
陈科比啊
胶没配好,比如胶中有颗粒或气泡,凝胶没冷却好
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问
wb细节问题求解?。?
balalaLy
可以两个一抗一起孵,或者先孵25的那个,再孵actin,最后孵两个二抗的混合液。不过,如果25那个蛋白表达低的话建议先孵这个,显影完之后再孵actin,以免actin条带太亮影响目的蛋白。上样量一般上20ug的蛋白量。
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