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hela细胞诱导脂滴生成
huarenqiang5
你这个没事,对实验结果没什么影响。
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问
求助|THP-1被诱导成为M1,M2巨噬细胞后如何才能消化下来啊
loveliufudan
消化THP-1细胞以获得单细胞悬浮液是一个具有挑战性的过程。试试下面的方法可能会有所帮助:1. 增加消化时间:有时候,消化时间可能需要更长。您可以尝试将消化时间延长到1小时或更长时间,以确保细胞完全消化。2. 提高消化温度:将消化温度提高到37°C可能有助于提高消化效果。请确保细胞在一个温度控制良好的环境中进行消化。3. 试用其他消化酶:除了Trypsin-EDTA外,还有其他消化酶可以用于消化细
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问
WB电泳求助,条带直接炸裂
huarenqiang5
考虑是电泳速度过快或电泳时温度过高或电压过高导致。
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问
CO ip实验中A蛋白拉B蛋白能行,但是B拉不出A是什么原因?
balalaLy
那可能是B抗体的问题,抗原抗体结合力弱
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问
老师们好,WB实验遇到这种问题是什么回事呀?感觉不是单一问题,为什么会出现这种情况呢?怎么处理呢?
yoloDP4U
可以更换新的电泳液,loading buffer也可以换新的
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问
老师们好,请问WB电泳液转膜液用太久了对结果有影响吗?原理是什么呀?
balalaLy
一般用过4、5次是没有问题的,用太多次会引入许多杂质,影响电流。
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问
求助 Raw265.7细胞CD86单阳性
huarenqiang5
主要是因为它们的基因编码不同,CD80和CD86(601020)基因分别编码B7-1和B7-2。
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问
高糖诱导细胞损伤,如何设置等渗对照组
loveliufudan
确定甘露醇添加量的一种常用方法是根据渗透压平衡原理来计算。在这种情况下,你希望甘露醇与高糖组具有相同的渗透压,以便能够作为等渗对照组。渗透压可以通过浓度来近似计算,使用Van't Hoff公式:渗透压 = 浓度 × 体积 × 摩尔折射系数(常数)。具体计算甘露醇添加量的步骤如下:1. 确定高糖组的浓度,如35 mM。2. 找到甘露醇的摩尔折射系数。可以在相关文献、化学手册或实验室常用的数据库中查找
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问
类囊体膜提取
loveliufudan
丙酮(丙酮酮或丙二酮)是一种有机溶剂,通常是无色液体。它在常温下具有较低的溶解度,约为24.7克/100毫升。这就是为什么丙酮不易溶于水的原因。如果你想配制80%的丙酮溶液,可以考虑使用以下步骤:1. 准备测量容器:选择一个容量合适的容器来配制溶液。确保容器干净且无污染。2. 加入丙酮:将所需的丙酮量慢慢倒入容器中。请注意,丙酮具有挥发性,所以在操作时要小心避免丙酮的散失。3. 加入水:向容器中加
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问
老师们好,我想保存WB结果比较好的膜,可以之后再显影看结果那种,请问有法子吗?能保存多久呢?
土井挞克树
保存膜可以浸泡在PBS或TBS中,4度放置。一般能保存一周左右
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问
我只上了两个maker,这其他的是咋来的啊
汤姆卜丽波
拔梳子的时候可能太用力了,你的胶孔在漏
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问
WB条带呈现出笑脸样条带是怎么回事?
陈科比啊
胶没配好,比如胶中有颗粒或气泡,凝胶没冷却好
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问
wb细节问题求解?。?
balalaLy
可以两个一抗一起孵,或者先孵25的那个,再孵actin,最后孵两个二抗的混合液。不过,如果25那个蛋白表达低的话建议先孵这个,显影完之后再孵actin,以免actin条带太亮影响目的蛋白。上样量一般上20ug的蛋白量。
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问
从细菌内提取蛋白做wb实验,常用的内参是什么?
loveliufudan
在从细菌中提取蛋白进行Western blot实验时,常用的内参有两种:原核生物中的通用蛋白:在细菌中表达量较为稳定且广泛分布的蛋白,如GroEL、DnaK等,通常作为内参来校正不同实验条件下的蛋白质表达量变化。特定蛋白:如果实验中需要检测的蛋白与某个特定蛋白有相关性,例如同属于同一个代谢通路或同一功能模块,则可以选择该蛋白作为内参来校正不同样品之间的蛋白质表达量变化。
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问
我想问一下我做IP-ms后并没有检测到目标抗体蛋白,后面又做了IP-WB验证结果也是符合质谱的结果,这个是否能说明抗体有问题或者
赛默飞世尔科技
如果整个实验的操作步骤和实验设计没有问题的情况下,IP-MS和IP-WB结果都没有靶蛋白,说明目标蛋白表达量很低。但首先需要排除一下,IP过程中是否存在抗原结合水平低,抗原洗脱水平低等因素的影响。
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问
请问在Co-IP结果中,阴参也能IP下来是什么原因?已经增加了洗涤的次数,但是洗涤是颠倒混匀的。
土井挞克树
考虑是阴参受到了蛋白污染,或者抗体与某些组分非特异性结合产生了ip条带
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问
在我做COIP时,经常会出现IP组蛋白表达甚至超过了INPUT组,是什么原因?
土井挞克树
考虑是抗体特异度差,没有特异性检测到目的蛋白导致的
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问
IgG也有目的条带,但是比实验组的IP样品弱,怎么办
土井挞克树
igG条带弱可能是由于裂解液中的去垢剂浓度太高或配方过于剧烈、蛋白与蛋白之间的相互作用太弱或不太稳定等原因导致。相应的举措有:1、降低去垢剂浓度或更换去垢剂种类;2、受蛋白的亚细胞定位影响,则新选择裂解液配方来释放目的蛋白;3、选择亲和力更高的抗体以捕获更多的目的蛋白,从而捕获更多的相互作用蛋白;4、选择目的蛋白或相互作用蛋白含量高的样品进行免疫共沉淀实验。
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问
我想问下为什么我跑的input,Ip,IGg都有条带
赛默飞世尔科技
input和IP泳道条带可以根据分子量来判断一下是否为目的蛋白,igg泳道通常是会在25kd,50kd出现抗体轻重链干扰条带
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问
免疫共沉淀IP样品,洗不干净怎么办,
土井挞克树
可以用甘氨酸洗脱:甘氨酸洗脱1. 用10 mM的Tris-Cl缓冲液把Beads洗3次,3,000 g速度离心5 min,尽量吸尽洗涤液;2. 加入洗脱缓冲液(0.2 M Glycine, 0.15% NP40,pH 2.3),一般50 µL的beads 需加入75-100 µL洗脱buffer;3. 室温震荡洗脱 10 min;4. 2000 g离心2 min,吸取上清到新的EP管中;5. 重复
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