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        wb无条带求助

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        加油冲呀1

        新手小白开始跑wb,跑的内参无条带,但是目的蛋白有,要不就是背景黑,或者条带虚且多。丽春红染色只有其中一条目的蛋白有,内参也无,望各位大佬指导一下问题出在哪?图片描述内参

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        3 个回答

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        一般内参抗体很少出问题,内参不出条带可能是位置不对,或者二抗种属不对。其次,抗体孵育使用的buffer,比如抗体稀释液或者TBST的 ph过高。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        1.转模板不平整,在内参的位置结合不紧密,导致内参蛋白没有完全转到膜上,可换平整的板试一试;2.抗体结合力较差,换个批次或者公司的试剂试一试;3.转膜时间不够或者过长,导致内参蛋白没能完全转到膜上或者转出膜外,

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        如果内参蛋白在你的实验中没有显示出条带,可能是由于以下几个原因:

        1. 组织/细胞提取的问题:内参蛋白在不同的组织或细胞类型中的表达水平可能不同。确保你使用的组织/细胞提取方法是适用于你的样品类型,并且蛋白提取过程中没有发生明显的问题,例如蛋白质溶解不彻底或蛋白质被降解。

        2. 蛋白负荷量的问题:内参蛋白的信号应该在蛋白负荷范围内处于线性响应区域。如果你加载的内参蛋白量过高或过低,可能会导致信号过强或过弱而无法观察到清晰的条带。尝试调整内参蛋白的加载量,使其处于合适的线性响应范围。

        3. 抗体问题:确保你使用的内参蛋白抗体的特异性和有效性。可以尝试使用不同来源或批次的抗体,或者与其他研究人员讨论他们在相同条件下使用的内参抗体。

        4. 实验条件问题:检查实验条件是否正确。例如,是否正确运行电泳和转膜步骤,是否使用正确的电泳和转膜条件,是否正确选择和稀释抗体,以及是否正确进行染色步骤等。

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