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科研学霸天团，48小时有问必答

问做了一年WB，gpx4趋势做不出来，甚至是反的，求大神指点

loveliufudan

以下是可能导致此问题的一些原因和建议： 1. 抗体选择：确保您使用的GPX4抗体质量良好，并且已经进行了充分的验证。验证抗体的特异性和灵敏性非常重要，可以通过使用已知GPX4表达的阳性对照样本来验证抗体的有效性。 2. 样本制备：正确的样本制备对于WB实验至关重要。确保样本处理和蛋白质提取过程正确无误。使用相同的样本制备方法和条件来比较不同条件下的GPX4表达。 3. 蛋白负荷量：确认您加载的蛋白

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问丙酮脱色脱脂后为什么还要用95%的酒精脱脂呢？再后面回流的目的是什么呀？

loveliufudan

丙酮和95%酒精的使用是为了脱色脱脂和去除脂质物质，而回流则是为了进一步的洗涤和去除残留物。这些步骤的目的是为了获得纯净的样品，以便进行后续的多糖和蛋白质提取。

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问酶活检测

dxy_xextz7w2

可能反应时间不够，可以延长反应时间再进行测定

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问血浆蛋白在此指什么而言？

loveliufudan

1. 在此背景下，血浆蛋白主要指参与炎症反应的各种蛋白质。这些蛋白质可能包括但不限于补体蛋白（一种参与免疫反应的蛋白质），凝血蛋白（如纤维蛋白），以及各种炎性因子和细胞因子（这些蛋白质在细胞之间进行信号传递，调控炎症和免疫反应）。2. 说到“血浆蛋白被激活”，这主要是指血浆中的某些蛋白质需要被激活才能执行其在炎症反应中的功能。例如，补体系统就由一系列在初始状态下是非活性的血浆蛋白组成。当发生感染或

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问关于car表达的检测

huarenqiang5

这种情况不能用anti-mouseF(ab)'2来检测 car的表达。

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问wb真的是玄学—wb条带不均匀

skyye

这个首先还是考虑是胶不均匀的问题。配胶时各成分需要充分混匀，配好胶后尽快使用，在4℃保存不超过一周

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问WB内参

skyye

右边一组的情况我没遇到过，但确实每次上样前需要将样本在室温下充分溶解并短暂离心。左边一组的话，第二个和第三个样的内参不齐，也可能跟测蛋白浓度时没测准导致的

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问总蛋白可不可以作为实验组？为什么

feixue7758527w

总蛋白也是可以作为实验组的，但是也要看具体时间的，要注意排除混杂因素的，其他条件要一致。

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问细胞加药培养后有一块地方细胞死了，能直接提蛋白跑wb吗？

feixue7758527w

可以直接提取蛋白跑WB的，但是也要具体分析，排除污染导致死亡的。

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问DSS蛋白多寡聚体实验

是TTT

准备蛋白样品:用反应缓冲液稀释蛋白样品。准备交联剂：用DMSO溶解配制DSS溶液。在蛋白样品中加入DSS交联剂:交联剂终浓度为0.25～5mM。反应溶液室温孵育0.5-1小时。淬灭反应:加入20~50 mMTris终止交联反应，室温静置15分钟。洗涤样品，进行WB实验。

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问蛋白条带上有黑色斑点，请问是什么原因

loveliufudan

出现黑色斑点可能有多种原因。以下是一些可能的原因和解决方法： 1. 抗体反应：可能是一抗或二抗与非特异蛋白结合，或者抗体自身发生了过度聚集。解决方法可以尝试降低抗体浓度，或者缩短孵育时间。3天的一抗孵育时间可能过长，通常过夜孵育就足够了。 2. 封闭液：如果封闭液未能完全覆盖滤膜，或者封闭液中的牛奶粉未能完全溶解，都可能引起斑点。应确保封闭液的制备正确，使用新鲜的封闭液，且封闭时液体充分覆盖滤膜。

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问请问这样的条带怎么改进是组织蛋白样品条带没有聚集在一起不知道怎么回事园里有大神知道吗

土井挞克树

考虑是蛋白组织有降解或者杂质，纯化一下在做吧

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问做ELISA 能不能用96孔细胞培养板？终止液加多加少影不影响最后读数？

dxyc42u

96孔板有点小，后续实验难度大

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问用pet32a载体表达的蛋白如何用肠激酶处理？

idiotOC0P

最近正好在做这个，我用的酶说明书是这样的体系

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问wb实验在最下方loadibg处有条带，如何去除

loveliufudan

如果你在Western blot实验中发现一些不明的带，可能是由于一系列因素导致的，包括但不限于非特异性结合、蛋白降解产物、抗体的交叉反应等。以下是一些可能的解决策略： 1. 确认一抗的特异性：如果可能，尝试使用另一种一抗或者使用已知阳性和阴性对照来验证一抗的特异性。 2. 改变阻断条件：增加阻断时间，或者改变阻断液的组成。例如，如果你现在使用的是5%牛奶，你可以尝试使用5%BSA，或者使用含有T

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问Meta 对数转换后的均值标准差

feixue7758527w

对数转化后的均数标准差是没办法进行meta分析的，还是要之前的原始数据进行分析的。以前有小软件能进行逆推的，但是现在都不能用了。

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问求助‖SDS-PAGE蛋白电泳结果怎么看呢？细胞裂解泡的条带有很多条，有的只有一条的呢？

loveliufudan

在一条泳道上看到很多条带，可能表示裂解液中的蛋白质多样性比较高。每条带代表一种或几种分子量相近的蛋白质。带的明亮度通常与该蛋白质的浓度有关，更亮的带表示该蛋白质更丰富。如果在一条泳道上只看到一条带，可能有几种解释： 1. 这可能意味着裂解液中只有一种主要的蛋白质，或者所有其他的蛋白质都在检测限度以下。 2. 如果这是一个验证泳道，可能表明你的抗体非常特异，只检测到了你感兴趣的目标蛋白。 3. 如果

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问求解答，加入IPTG诱导后，细菌增长十分缓慢怎么回事

huarenqiang5

考虑是你加的IPTG浓度过高所导致的。

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问WB整个背景都是杂条带是什么回事嘞

feixue7758527w

我觉得你的样本首先要适度纯化。然后分离机胶可以换一个浓度试试。换成小浓度分离胶试试。然后洗脱时间加长一点。

4 回答263 围观

问牛奶中的各种蛋白怎么测活性啊

loveliufudan

测量牛奶中蛋白质活性的具体方法将取决于这些蛋白的功能。比如，如果某个蛋白是酶，那么你可以通过测量它的催化活性（如衡量底物转化为产品的速率）来测定其活性。如果蛋白质具有结合活性，比如抗体或某些受体，你可以使用诸如ELISA之类的结合测定实验。在未知蛋白的情况下，可能需要借助蛋白质的已知信息，例如已发表的文献或数据库，来确定可能的功能测试。至于开发健康食品，你需要考虑以下几个步骤： 1. 确定产品的健

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