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        DSS蛋白多寡聚体实验

        user-title

        DT杨

        请问各位前辈,最近想做DSS蛋白交联实验,有哪位大神有详细的protocol吗

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        4 个回答

        user-title

        是TTT

        有帮助
        1. 准备蛋白样品:用反应缓冲液稀释蛋白样品。
        2. 准备交联剂:用DMSO溶解配制DSS溶液。
        3. 在蛋白样品中加入DSS交联剂:交联剂终浓度为0.25~5mM。
        4. 反应溶液室温孵育0.5-1小时。
        5. 淬灭反应:加入20~50 mMTris终止交联反应,室温静置15分钟。
        6. 洗涤样品,进行WB实验。
        user-title

        dxy_mqg1dtg8

        有帮助

        DSS蛋白交联实验是一种用于探究蛋白质相互作用的实验方法。下面是一些通用的实验步骤:

        1. 制备样品:将待测蛋白质或蛋白质复合物加入样品缓冲液中,使其浓度在0.1-1 mg/mL之间。

        2. 加入DSS交联剂:将DSS交联剂加入样品中,使其浓度在0.1-1 mM之间。

        3. 交联反应:将样品在室温下孵育15-30分钟。

        4. 加入还原剂:加入还原剂(如DTT或β-巯基乙醇)破坏未反应的DSS交联剂。

        5. SDS-PAGE:将样品进行SDS-PAGE电泳,并进行Western blot分析或直接染色。

        需要注意的是,DSS交联剂的浓度和反应时间需要根据实验需要进行优化。此外,DSS交联剂对于不同的蛋白质可能会有不同的交联效果,需要进行实验验证。

        user-title

        sswei

        有帮助

        操作步骤:

        用反应缓冲液配制蛋白质溶液。

        使用前准备交联剂:用DMSO或DMF配制DSS溶液。称量2mg DSS交联剂到微量离心管中,加入溶剂216μL,最终浓度为25mM。

        向蛋白质样品中加入交联剂,如果蛋白质浓度大于5mg/mL,则使用10倍摩尔过量的交联剂。若样品小于5mg/mL,使用20~50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25~5mM。

        将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。

        加入淬灭缓冲液淬灭反应,终浓度为20~50 mMTris,或通过透析/脱盐除去未反应的试剂。

        淬灭反应在室温下进行15分钟。

        user-title

        DT杨user-title

        细胞蛋白样品准备可以用RIPA裂解提取吗,交联淬灭完之后可以直接加loadding buffer变性直接跑SDS-pages胶吗

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        交联步骤:

        1.使用DMSO溶解适量交联剂至适当浓度使用适宜的buffer将蛋白稀释或浓缩至适当浓度

        2.加入适量交联剂,室温反应1h

        3.加入2μL 1M pH 7.5 的Tris溶液,使溶液中Tris浓度为20-50mM,终止反应 ,室温静置15min

        4.加入6倍体积的-20度下预冷的丙酮来沉淀蛋白。混匀,于-20℃下放置3h以上。

        5.在离心机里以14,000rpm离心20 min。吸出大部分上清液,留下最后一滴,以免吸到沉淀。如果样品中有去垢剂则再用500μL -20℃预冷的丙酮清洗两次。

        打开管盖,风干样品

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