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科研学霸天团，48小时有问必答

问求问，外泌体悬液如何提取蛋白呢？

土井挞克树

差速离心法是根据不同蛋白质分子及囊泡、细胞及细胞碎片等在均匀悬液中沉降速度的差异,通过逐渐增加离心力或离心时间,分离沉淀或上清的方法来提取。一般先采用低速离心如1500×g离心10min去除细胞碎片和大分子蛋白质,再高速离心如100000×g离心2h得到目的微球,然后用0.22μm的滤膜去除凋亡小体、微泡等进一步纯化。

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问用磁力搅拌器对药品乙醇回流的话，将圆底烧品里放入乙醇，然后将放有乙醇的圆底烧瓶放入磁力搅拌器中，磁力搅拌器里的液体可以放水嘛

土井挞克树

可以放水，有时候还需要利用水来降温

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问把中药材用粉碎机打成粉末，如果粉末不过筛，就这样直接用乙醇回流提取，影响大吗？需要过筛再提取嘛

skyye

这个影响应该不大吧，当然也要看具体中药材。没过筛的话可能存在一些较大颗粒的杂质，可能会影响乙醇回流提取效率

4 回答697 围观

问有老师再帮忙分析一下下面的条带是由什么原因造成的吗

balalaLy

制胶的问题：玻璃板没有洗干净或者胶没有凝好导致有拖尾，中间位置很脏，膜要充分激活，封闭以及一抗之后洗膜要充分，可以增加洗膜时间和次数以及tbst中土温的含量

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问在高效液相实验中，建立标准品线性关系考察，是为了得到供试品的浓度的嘛？

高山云初

当然，最后得出的就是供试品的浓度了！

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问western blot 总是出现这样的情况，想问有老师知道是什么原因导致的吗

feixue7758527w

背景太深，多数情况下是封闭不好，跑胶时间适当延长，再有就是多拍几张照片就好。

6 回答323 围观

问中药石见穿中的迷迭香酸在治疗盆腔炎疾病中起主要作用还是石见穿中的齐墩果酸和熊果酸起主要作用？

阿贰不2

主要是齐墩果酸和熊果酸起抗炎作用。

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问中药石见穿做高效液相实验，选取标准品时好似选迷迭香酸好还是选齐墩果酸和熊果酸好（主要是对于盆腔炎的治疗上）

小小翻车鱼

关于选择迷迭香酸、齐墩果酸还是熊果酸作为标准品进行高效液相色谱实验，这需要根据已有的研究文献和实际需求来决定。下面是关于这三种化合物的一些简要介绍：1. 迷迭香酸：迷迭香酸是一种天然的酚酸类化合物，具有很强的抗氧化作用。一些研究表明，迷迭香酸在抗炎、抗菌和抗肿瘤方面具有潜在作用，但在盆腔炎治疗方面的研究较少。2. 齐墩果酸：齐墩果酸是一种五环三萜皂苷，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种药理活性。

6 回答291 围观

问Erastin是铁死亡激动剂，主要是通过阻断XC-通路！为什么使用Erastin 后，细胞中亚铁离子Fe2➕会升高？

土井挞克树

激动通路后会激动fe2+的产生，所以fe2+会升高

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问中药红藤、石见穿，败酱草、野菊花，忍冬藤，马鞭草，采用乙醇回流提取的话，选取的乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时间分别大概是？

小小翻车鱼

采用乙醇回流提取法提取中药中的活性成分时，一些关键参数需要根据实际情况进行调整。以下是一个大致的参考范围：1. 乙醇浓度：通常选择50%-70%的乙醇，因为较高的乙醇浓度可以增加有效成分的溶解度，而较低的乙醇浓度可以保留更多的药材中的生物活性物质。根据具体药材和提取目的，可以适当调整乙醇浓度。2. 提取温度：提取温度通常在60-80摄氏度之间。较高的温度可以提高有效成分的溶解度，但过高的温度可能导

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问标准孔，空白孔，样本孔都需要做复孔吗还是值标准孔做复孔就行

高山云初

为了保证实验结果的准确性，建议标准品和样品都做复孔，但并不强行要求ELISA实验一定要做复孔，客户可根据自己的需求设定复孔实验。为保证结果的准确度，不建议减少标曲的孔数，请确保能够检测至少6个不同的标准品浓度（含空白孔)。

6 回答1203 围观

问elisa试剂盒的专一性如何验证？

土井挞克树

专一性主要靠标准曲线来验证，拿到试剂盒首先做标曲，标曲好基本上试剂盒就没问题

5 回答541 围观

问提蛋白跑胶总是有杂带，怀疑是提蛋白出了问题，RIPA一定要放在-20么，4度放置一晚上有影响么

balalaLy

RIPA放4度没有太大影响。杂带一般是蛋白降解或者抗体特异性不高、浓度不合适以及洗涤不够充分

8 回答3226 围观

问铁死亡和氧化应激的区别？

sswei

细胞氧化应激反应涉及到多种信号通路，并且在发育过程、正常生理活动，以及多种病理过程有重要作用。铁死亡（Ferroptosis）是近年来发现的一种受调节的细胞死亡类型。铁死亡主要由几种关键的细胞代谢通路（包括铁代谢、ROS代谢、氨基酸代谢和脂代谢等）的紊乱所导致。最主要的铁死亡调节因子包括GPX4和p53等。铁死亡被证明与正常发育、缺血性器官损伤、神经退行性疾病、免疫系统活动等多种生理或病理过程有关

4 回答1813 围观

问ITRAQ/TMT实验中的“组分”或者“SCX分级”代表什么

土井挞克树

iTRAQ/TMT实验对肽段进行的是2D-LC-MS，其中第一维的色谱分析主要采用的是SCX或者高pH值的HPLC对标记好的肽段混合样品进行初步分离,而将样品分离成10个组分，以此来达到降低每个组分中肽段样品的复杂程度，然后再将这十个组分分别在进行LC-MS，以便能达到更好的质谱鉴定效果。

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问做优化工艺，请问下大佬们是做正交实验优化好还是做相应面实验好？已方便后续的文章投稿的话是选择正交试验好还是现在响应面好？

土井挞克树

正交应用的广一些，但是相应面准确度更高一些

5 回答2776 围观

问把六种不同种类的中药材打成粉末，是用乙醇超声提取进行冻干后上液相测含量好点？还是用乙醇回流提取冻干后上液相好？

土井挞克树

回流的话各组分提取纯度要高一些

4 回答258 围观

问蛋白质组学质谱数据分析求助？

qzming65

Mascot daemon操作简单，界面简洁，可以根据输入数据分析其中的蛋白质组分，并进行翻译，十分适合研究者使用。

4 回答451 围观

问iTRAQ/TMT技术相对于电泳技术有什么优势？

小Q医僧

iTRAQ/TMT分辨率高，并且绝大多数蛋白都有定量和定性信息；且iTRAQ通量高，可以一次完成多个样品检测，适合于多组样品间的同时比较以及生物学过程的动态检测。

4 回答450 围观

问为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中检测不到？

于小鱼鱼1998

itraq对蛋白纯度要求较高，检测不到可能是因为蛋白纯度不足

3 回答329 围观

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