提蛋白跑胶总是有杂带，怀疑是提蛋白出了问题，RIPA一定要放在-20么，4度放置一晚上有影响么

RIPA放4度没有太大影响。杂带一般是蛋白降解或者抗体特异性不高、浓度不合适以及洗涤不够充分

如果是裂解完成的未离心分离的裂解液，需要4°保存，室温过夜放置肯定不行的，因为胞内释放出大量的杂质，比如核酸，内毒素，核酸内外切酶，病毒等，这些杂质会在室温发挥作用，可能会酶解你的目标蛋白。

如果是配置好准备用来的裂解的缓冲液，室温放置过夜可能会导致缓冲液自身会长菌，造成污染。最好是当天配置新鲜的溶液，以免影响实验结果。

如果在蛋白质电泳中总是出现杂带，可能有几个可能的原因导致这种情况。以下是一些常见的问题和可能的解决方案：

1. 蛋白质提取问题：杂带可能是由于蛋白质提取的问题造成的。确保使用合适的提取缓冲液（如RIPA缓冲液）并适当破碎细胞，以确保完全的细胞破碎和蛋白质的释放。

2. 样品预处理问题：在上样样品之前，建议进行样品预处理，如沉淀细胞碎片、去除溶液中的杂质或通过醇沉淀纯化蛋白质等。这些步骤可以帮助减少杂带的产生。

3. 电泳条件问题：请确保在电泳过程中使用适当的电泳条件，包括正确的电压和电流设置、正确的凝胶浓度和电泳缓冲液pH值等。

关于RIPA缓冲液的储存，一般来说，将其存储在-20可以帮助防止缓冲液中成分的降解和不稳定性。将RIPA缓冲液存放在4度一晚上虽然不是理想做法，但一般情况下不会对实验结果产生太大影响。不过，为确保最佳结果，建议按照制造商的建议将缓冲液存储在推荐的条件下。

提蛋白跑胶出现杂带的可能原因有很多，不一定是提蛋白的问题。首先，可以检查实验操作是否正确，例如是否加入足够的蛋白负载量、是否正确运行电泳等。此外，还可以检查其他实验条件，如缓冲液的配制、电泳条件等。

至于RIPA缓冲液的储存温度，一般建议将其储存在-20摄氏度，可以确保其长期保存稳定。但是如果只是在4摄氏度存放一晚上，一般情况下不会对RIPA缓冲液的性能产生明显影响。如果需要长时间保存，建议还是将其置于-20摄氏度冷冻保存。总之，提蛋白跑胶出现杂带的问题需要综合考虑多个因素，并进行仔细排查，以确定具体原因。

你需要根据试剂保存条件，有些是可以4度保存

原因：与细胞系裂解物相比，原代细胞或组织提取物会倾向于有较高的背景和降解条带。建议：1. 用新鲜提取的，经过超声处理的澄清的组织提取物能降低背景。2. 同时，用去垢剂含量较高的RIPA buffer裂解组织，可得到裂解更彻底、一致性更高的裂解物。原因：蛋白被降解。建议：1. 提取液确保含有蛋白酶抑制剂，并超声；2. 蛋白样品提取后分装－20℃或－80℃短期保存，避免反复冻融，有条件尽量用新鲜提取的蛋白。

ripa放在4°一晚时间一般没有什么影响，建议从其他方面找原因，如:1.一抗特异性不高，存在交叉反应；2.二抗特异性可能有非特异性结合；3.可能是一抗二抗浓度过高； 4.上样量过大；5. 封闭不足等。

4摄氏度容易失效，尽量避免4度保存