实验问答22,754,011 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问ROS活性氧检测 DCFH-DA检测

土井挞克树

考虑空白组可能存在污染，比如荧光剂污染就会出现空白组荧光强这个问题

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问请问如何能从二级质谱为蛋白定性？

huarenqiang5

利用液相色谱串联质谱（LC-MS-MS）的方式检测。先通过液相进行有效分离，将各蛋白质组分分开，再通过二级质谱进行片段化检测定性，真正的将蛋白定性做到速度快且数据精准。

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问质谱数据结果的最大利用

huarenqiang5

通过对质谱数据的后处理，将目标化合物的质谱图从原始谱图中提取出来，根据新建的“纯净”的质谱图对目标化合物进行确证将更有实际应用的价值。通常提取“纯净”的质谱图的方法是扣除“本底”的方法，主要过程为从目标化合物的质谱图中减去其周围本底的质谱图。然而其效果只能去除那些相对丰度较低的本底干扰离子(例如柱流失物所产生的碎片离子)。对于丰度较高的共流出物及复杂基质干扰物的离子，扣“

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问WB实验结果不同的原因是什么？

sswei

可能是在显影液环节，简单来说就是膜没有淋干净，上面残留参差不齐的 T/TBS，T/TBS 能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的 T/TBS 稍微多一点就可能导致显影效果下降

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问打修饰组学，如果打到的片段比较少是不是就不可信呢，如何提高样品质量，都有什么影响因素

huarenqiang5

从以下几点来提高样品质量:1.样本收集方案：研究方案中应明确样本分组，每组样本数量，样本供体的纳排标准，每个样本的采集方法、体积/重量，现场前处理要求，储存条件，样本信息收集标准等内容，避免产生错误采集、混肴、交叉错配等问题。2.耗材、储存、运输条件准备:离心管/离心机、现场前处理试剂、移液枪、封口膜、样本标签、干冰、保温厚泡沫箱、-20℃/-80℃冰箱等均应按标准准备到位，最好是知名品牌，并经过

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问请问各位老师，分泌蛋白跑WB，内参应该选什么呢

土井挞克树

内参一般可以选择β-actin、β-tubulin等

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问wb分析

蚂蚁呀嘿嘿嘿不嘿

我的mmp9也这样，但我觉得这个可能是非特异性条带，盖住上面的再显

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问elisa和比色法对脑组织的预处理有什么不一样吗

土井挞克树

预处理差不多，都需要对组织预冷之后固定

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问配电极液和电转液先加粉剂还是先加溶液定量

huarenqiang5

电转液配方的过程通常包括以下步骤：首先将电解质固体加入溶剂中，然后加入适量的添加剂，搅拌均匀，直到电解质固体完全溶解。在制备过程中，需要注意的是，应该控制好电解质固体的溶解度和添加剂的用量，以确保电转液的性能符合要求。

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问线粒体生物发生相关问题

huarenqiang5

主要指标有线粒体呼吸链酶活性、线粒体膜电位、线粒体DNA含量、线粒体膜通透性等。

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问蛋白组学的鉴定方法有哪些？各方法的优缺点？

土井挞克树

常用的有质谱法和芯片法，质谱法应用范围广泛，芯片法敏感度高

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问如何利用质谱技术研究蛋白质组学

土井挞克树

质谱鉴定互作蛋白主要是对互作蛋白质进行确认，在此之前需要通过蛋白互作实验进行互作蛋白的筛选和分离。常见质谱鉴定互作蛋白的样品多来自于IP，Co-IP蛋白互作样品，pull-down蛋白样品、串联亲和纯化技术或蛋白质微阵列得到的蛋白样品等。这些蛋白互作分析技术均有各自的优缺点，Co-IP的优点为可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合物，缺点是灵敏度较低不能进行亲和力低和瞬间的蛋白质相互作用分析检测

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问质谱技术如何应用于研究蛋白质研究

高山云初

可以分析生物样本中蛋白质的表达和修饰情况，发现与疾病相关的一些生物标志物

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问质谱和蛋白质组学的数据分析应用

huarenqiang5

可以利用双杂交技术和质谱法来研究蛋白质相互作用网络的构建。

3 回答603 围观

问中药配方颗粒溶解过滤过可以直接开展细胞水平的研究吗？

龙大人驾到

中药配方颗粒溶解过滤后的液体可以用于细胞水平的研究，但需要注意以下几个方面：1. 细胞毒性评估：中药配方颗粒中可能存在活性成分或化合物，对细胞有潜在的毒性。在进行细胞水平的研究之前，需要对中药配方颗粒溶液进行细胞毒性评估，确保其对目标细胞不会产生明显的毒性影响。2. 有效成分的验证：中药配方颗粒溶液中可能含有多种化合物，其中是否存在对目标细胞具有生物活性的有效成分需要进行验证。可以通过分离、纯化和

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问组织蛋白酶和趋化因子共同孵育看结果，可以做免疫共沉淀来验证吗？

sswei

免疫共沉淀能看出组织蛋白酶对趋化因子的切割后产生更小分子条带的反应

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问考马斯亮蓝（兰）R-350是什么呀，怎么和R250、G250区别呀？实验时怎么选择，原理是什么

huarenqiang5

考马斯蓝R-250和G-250染料是考马斯染料的两种最常见的化学形式，是二磺化的三苯基甲烷化合物。R-250（红色）缺少以G-250（绿色）形式存在的两个甲基。“250”最初表示染料的纯度。考马斯蓝染色原理：不同的颜色是染料分子不同带电状态的结果。当pH值小于0时，考马斯蓝G250染料会腐蚀所有带正电荷的三个氮原子，颜色为红色最大吸收波长为465nm。当pH值约为1时，染料的总电荷为+1（2-磺酸

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问大于220kd的蛋白该怎么设置转膜条件，还有跑胶时怎样可以使杂带减少，哪位帮忙解决一下，谢谢；？

龙大人驾到

对于大于220 kDa的蛋白，可以考虑以下转膜条件：1. 延长转膜时间：由于大分子量蛋白需要更长的时间才能转移到膜上，因此可以考虑延长转膜时间，例如将转膜时间延长至过夜。2. 降低电流密度：降低电流密度可以减少转膜时蛋白的聚集，从而提高转膜效率。建议使用电流密度为0.8 mA/cm2左右的条件。3. 使用更大的孔径滤纸：使用更大孔径的滤纸可以减少蛋白的滞留，提高转膜效率。对于跑胶时如何减少杂带，可

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问如果筛选出的差异代谢物很少，该怎么办？

龙大人驾到

当利用常用的阈值筛选差异代谢物时，如果筛选到的差异代谢物很少，可能有以下几个原因：1. 样本数量不足或质量差：样本数量不足或样本质量差可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。2. 表达水平差异较小：如果筛选的阈值较高，可能会导致表达水平差异较小的代谢物无法被筛选出来。3. 生物学变异：生物学变异可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。为了解决这些问题，可以考虑以下几个方法：1. 增加样本数

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问做SDSPAGE跑蛋白胶，我的基因预测出来的蛋白是10kda，用的载体是pgex，26kDa，跑出来的胶图是35kda左右

高山云初

会把载体上的所有基因表达一遍,当然,基因本身不受影响。

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