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elisa和比色法对脑组织的预处理有什么不一样吗
土井挞克树
预处理差不多,都需要对组织预冷之后固定
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问
配电极液和电转液先加粉剂还是先加溶液定量
huarenqiang5
电转液配方的过程通常包括以下步骤:首先将电解质固体加入溶剂中,然后加入适量的添加剂,搅拌均匀,直到电解质固体完全溶解。在制备过程中,需要注意的是,应该控制好电解质固体的溶解度和添加剂的用量,以确保电转液的性能符合要求。
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问
线粒体生物发生相关问题
huarenqiang5
主要指标有线粒体呼吸链酶活性、线粒体膜电位、线粒体DNA含量、线粒体膜通透性等。
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问
蛋白组学的鉴定方法有哪些?各方法的优缺点?
土井挞克树
常用的有质谱法和芯片法,质谱法应用范围广泛,芯片法敏感度高
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问
如何利用质谱技术研究蛋白质组学
土井挞克树
质谱鉴定互作蛋白主要是对互作蛋白质进行确认,在此之前需要通过蛋白互作实验进行互作蛋白的筛选和分离。常见质谱鉴定互作蛋白的样品多来自于IP,Co-IP蛋白互作样品,pull-down蛋白样品、串联亲和纯化技术或蛋白质微阵列得到的蛋白样品等。这些蛋白互作分析技术均有各自的优缺点,Co-IP的优点为可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合物,缺点是灵敏度较低不能进行亲和力低和瞬间的蛋白质相互作用分析检测
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问
质谱技术如何应用于研究蛋白质研究
高山云初
可以分析生物样本中蛋白质的表达和修饰情况,发现与疾病相关的一些生物标志物
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问
质谱和蛋白质组学的数据分析应用
huarenqiang5
可以利用双杂交技术和质谱法来研究蛋白质相互作用网络的构建。
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问
中药配方颗粒溶解过滤过可以直接开展细胞水平的研究吗?
龙大人驾到
中药配方颗粒溶解过滤后的液体可以用于细胞水平的研究,但需要注意以下几个方面:1. 细胞毒性评估:中药配方颗粒中可能存在活性成分或化合物,对细胞有潜在的毒性。在进行细胞水平的研究之前,需要对中药配方颗粒溶液进行细胞毒性评估,确保其对目标细胞不会产生明显的毒性影响。2. 有效成分的验证:中药配方颗粒溶液中可能含有多种化合物,其中是否存在对目标细胞具有生物活性的有效成分需要进行验证。可以通过分离、纯化和
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问
组织蛋白酶和趋化因子共同孵育看结果,可以做免疫共沉淀来验证吗?
sswei
免疫共沉淀能看出组织蛋白酶对趋化因子的切割后产生更小分子条带的反应
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问
考马斯亮蓝(兰)R-350是什么呀,怎么和R250、G250区别呀?实验时怎么选择,原理是什么
huarenqiang5
考马斯蓝R-250和G-250染料是考马斯染料的两种最常见的化学形式,是二磺化的三苯基甲烷化合物。R-250(红色)缺少以G-250(绿色)形式存在的两个甲基。“250”最初表示染料的纯度。考马斯蓝染色原理:不同的颜色是染料分子不同带电状态的结果。当pH值小于0时,考马斯蓝G250染料会腐蚀所有带正电荷的三个氮原子,颜色为红色最大吸收波长为465nm。当pH值约为1时,染料的总电荷为+1(2-磺酸
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问
大于220kd的蛋白该怎么设置转膜条件,还有跑胶时怎样可以使杂带减少,哪位帮忙解决一下,谢谢;?
龙大人驾到
对于大于220 kDa的蛋白,可以考虑以下转膜条件:1. 延长转膜时间:由于大分子量蛋白需要更长的时间才能转移到膜上,因此可以考虑延长转膜时间,例如将转膜时间延长至过夜。2. 降低电流密度:降低电流密度可以减少转膜时蛋白的聚集,从而提高转膜效率。建议使用电流密度为0.8 mA/cm2左右的条件。3. 使用更大的孔径滤纸:使用更大孔径的滤纸可以减少蛋白的滞留,提高转膜效率。对于跑胶时如何减少杂带,可
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问
如果筛选出的差异代谢物很少,该怎么办?
龙大人驾到
当利用常用的阈值筛选差异代谢物时,如果筛选到的差异代谢物很少,可能有以下几个原因:1. 样本数量不足或质量差:样本数量不足或样本质量差可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。2. 表达水平差异较小:如果筛选的阈值较高,可能会导致表达水平差异较小的代谢物无法被筛选出来。3. 生物学变异:生物学变异可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。为了解决这些问题,可以考虑以下几个方法:1. 增加样本数
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问
做SDSPAGE跑蛋白胶,我的基因预测出来的蛋白是10kda,用的载体是pgex,26kDa,跑出来的胶图是35kda左右
高山云初
会把载体上的所有基因表达一遍,当然,基因本身不受影响。
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问
蛋白质分子量很小,怎么做wb? 要验证某个细胞上有无该蛋白的存在,需要做免疫组化和western blot 试验吗?做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗?
周末也要努力呀
可以使用WB或者PCR验证一下,也可以搜索相关文献基础,小分子的WB需要减少转膜时间。
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问
用高效液相测红景天苷、绿原酸、迷迭香酸的含量,这些标准品用什么溶剂溶解好?多少浓度的溶剂溶解呢?
huarenqiang5
测迷迭香酸的含量一般用甲醇:0.1%三氟乙酸(40:60),流速1.0mL·min-1,检测波长330nm,柱温35℃。
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问
关于WB蛋白质提取,如果是悬浮细胞或者说细胞死亡过多怎么提取(可以的话发下实验方案)?谢谢!
周末也要努力呀
悬浮细胞离心后直接加裂解液就行了,最好超声一下增加浓度
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问
趋化因子CCL20和CTSD/CTSB怎么共同孵育,怎么继续做Western实验
龙大人驾到
想要在硬骨鱼中重复一篇文献中的实验,这篇文献中的实验主要是研究组织蛋白酶B和D对趋化因子CCL20的切割作用。下面是一些可能有用的步骤:共同孵育:共同孵育是将两种蛋白质一起孵育的实验步骤,目的是研究它们之间的相互作用。在共同孵育前,需要确定孵育的最佳条件,如温度、时间和缓冲液等。对于硬骨鱼中的组织蛋白酶和CCL20,可以先尝试在不同的缓冲液中进行共同孵育,例如PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液等
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问
wb中,一抗敷完,可以泡在tbst里面第二天再敷二抗吗?
EnvyXJV6
一定洗一下 不然影响最终效果 不建议这么操作,
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问
构建pre-miRNA过表达载体问题
高山云初
萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶基因,基因用LUC和pmirG没有什么区别。
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问
如何将GST标签添加至蛋白的C末端?
huarenqiang5
一般利用重组DNA技术插入到目的蛋白的C末端。
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