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科研学霸天团，48小时有问必答

问蛋白纯化时，老是挂不上柱子是为什么呢？

百泰派克-李工

在蛋白纯化过程中，如果蛋白质不能有效地吸附到柱子上，可能有几个原因：1.缓冲液pH不适宜：蛋白质的结合通常取决于其等电点和缓冲液的pH。如果pH不适宜，蛋白质可能无法正确结合。2.盐浓度过高或过低：盐浓度会影响蛋白质的溶解度和结合能力。如果盐浓度不适宜，可能会阻碍蛋白质的吸附。3.柱子的问题：柱子可能被堵塞或者失活。需要检查柱子是否正确存储和维护。4.蛋白质的特性：有些蛋白质可能因为其特殊的物理或

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问蛋白表达的时候一段加his和两段都加有什么区别吗？会对影响吗？

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问蛋白用pmal载体表达不出来，表达出来的是一条比自己的目的条带大20左右的带，自己的条带应该在65左右

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问各位大佬，想问问这个条带跑成这样可能是什么原因呀，跑了好几次都有这样的情况。

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问重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗？

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问Coip实验IgG总是有条带

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问ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠造模2月到3月，小鼠体重会增长吗？

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问WB肠组织蛋白提取上清黄色正常吗？

百泰派克-李工

在Western Blot（WB）实验中，肠组织蛋白提取的上清呈现黄色是正常的情况。这种黄色通常来源于组织中的胆汁色素，这些色素可以使蛋白提取液呈现黄色。然而，需要注意的是，样品的颜色并不直接影响Western Blot实验的结果，更重要的是确保蛋白提取和浓度测定的正确性。如果有其他异常现象或者实验结果不理想，可以考虑检查提取步骤和使用的试剂。

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问蛋白上样缓冲液HU buffer室温放置几小时会有影响吗

百泰派克-李工

蛋白上样缓冲液（HU buffer）放置在室温下几小时通常不会对其性能产生重大影响。这种缓冲液通常包含有助于维持蛋白质稳定性的成分，如还原剂和防止蛋白降解的物质。然而，长时间的室温暴露可能会降低其效率，尤其是如果缓冲液中包含敏感的还原剂，如DTT或β-巯基乙醇。为了保证最佳效果，最好按照制造商的建议储存和处理缓冲液，并在使用前进行适当的预热。

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问兔多抗用溴化氢琼脂糖凝胶纯化没有成功是什么原因？一般怎么验证抗原偶联上了？

百泰派克-李工

使用溴化氢琼脂糖凝胶纯化兔多抗失败可能有多方面的原因，比如：1.凝胶本身的问题：凝胶的特性可能不适合所用的抗原或抗体，不同的凝胶有不同的孔隙大小和亲和力特性，确保使用的琼脂糖凝胶适合于你的实验。2.偶联效率低合：如果抗原和载体（如琼脂糖珠）的偶联效率不高，可能导致目标抗体的亲和力不足。3.洗脱条件：洗脱条件（如pH、盐浓度）可能不适宜，导致抗体不能有效从凝胶中洗脱出来。调整洗脱液的pH值或盐浓度可

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问维生素D3真的可以诱导骨髓间充质干细胞向破骨细胞分化么？

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问跑胶marker条带背景变透明

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问目的蛋白分离正常，但内存actin连在一起，这要怎么办？

dxy_0wr8rcjw

我想请问下你这目的蛋白为啥能分离开啊我的都是连的很紧密

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问求助！为什么actin跑出来总是连在一起是为什么？

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问Wb小白求助各位大佬肠occludin

dxy_18063lu9

请问你跑出来了吗？？用什么参数？条带怎么样？

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问同一个实验，但是不同的人做出来结果差异大的原因是什么？

露路1234

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问肿瘤成瘤后注射慢病毒后检测的时间

feixue7758527w

一般就是一周后进行检测，如果没有就要隔周进行一次检测，然后精确时间的

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问同样的制胶条件和环境，一块胶上样丝滑无阻碍，一块总觉得上样孔里有残胶

feixue7758527w

这个可能是梳子不行的，你可以拔掉梳子后用枪吹打一下加样孔试试

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问原核表达重组质粒测序正确，构建成功，但是双酶切验证跑不出条带这是为啥

周末也要努力呀

有可能，也可以从下面原因考虑：1. 酶切条件不正确：双酶切验证需要使用适当的酶切缓冲液和温度来进行酶切反应。如果酶切条件不正确，可能导致酶切不完全或者根本没有酶切产物。建议检查酶切反应条件是否正确，并根据酶切酶的推荐条件进行优化。2. 酶切位点有变异：双酶切验证需要确保目标序列中存在预期的酶切位点。如果目标序列中的酶切位点发生了变异，可能导致酶切不完全或者根本没有酶切产物。建议重新检查目标序列的酶

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问转录组学差异基因没有鉴定出名字是为什么

土井挞克树

没有名字可能是鉴定错误，重新鉴定出对应的id后再设计引物

3 回答836 围观

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