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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问转出来的膜一边清晰，一边花，还有一张膜直接全花是怎么回事？180mA 90分钟转膜液也是新配的

异乡人hyq

我分析可能是有气泡或者夹得不紧。

10 回答961 围观

问植物蛋白质的提取方法及注意事项？

迟C迟

1、将组织称重，减去EP管重量，研磨一定要充分2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心，12000转，4℃，30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃

3 回答2874 围观

问为什么电泳出来的marker一样，转膜后出来的膜条，一个marker清楚，一个marker变粗。

米米米小喵

建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染色以进行逐步检验问题出在哪。

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问IP的阴性对照组IgG中出现了目的条带，是我提的蛋白不纯吗，还是其他地方出了问题

米米米小喵

加入的A蛋白抗体和IgG 抗体，在最后一步的煮样中，被β巯基乙醇破坏了结构，变成了重链和轻链，随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同，又被你的B蛋白抗体识别出来，所以显影就出现了条带。

6 回答11030 围观

问外泌体纯化超速离心，亲和纯化，微流控，粒径排阻色谱

Omiget12

本人用过一款试剂盒，方法简单，提的外泌体也比较纯

6 回答773 围观

问wb实验曝光后目的蛋白连成一条线是什么原因呢？

dxy_5kxfx7e

上样量没有问题的话，大部分原因应该的胶的问题

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问质谱中肽段匹配打分是怎么来的，代表什么

异乡人hyq

做PMF一般得分超过60分(P<0.05)就算成功鉴定，而串联质谱，得分超过60分或者虽然没有超过60分，但是有最少一条肽段的得分超过30分就算成功鉴定。

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问质谱中的假阳性和假阴性什么意思

lzy必有我师

我们讲的假阳性通俗一点就是并不是真正的阳性，假阴性也就说明不一定就是阴性，而是阳性，但有可能因为某种特定的因素导致其结果是阴性的。

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问蛋白质组学，网络药理学找差异蛋白？

米米米小喵

蛋白质组学和转录组学都是从基础研究水平上来缩小我们实验的范围，运气好，能够碰到一个单基因控制的，或者相互作用网络比较简单的蛋白，我们就能具体解决某一个问题，但大部分时候只能够给我们提出一个方向。

3 回答488 围观

问从左到右依次为input,IgG,IP。蛋白分子量是110kD，但是IP组的蛋白条带在100kD。请问这个结果能用吗？

dxy_9elsat18

可以用。IgG 家族有4类： IgG1,IgG2, IgG3, IgG4. IP 共沉淀其中一类，分子量在100 Kd 左右。

6 回答5162 围观

问实验中，料液中固含量高，操作过程中，膜面易产生浓差极化现象，显著降低膜通量，有什么办法可以改善这种情况？

未来9

在膜分别技术应用过程中，产生膜的污染是在所难免的，产生膜的污染的缘由许多，膜污染缘由比较复杂，但究其主要缘由是浓差极化和膜污染。浓差极化是膜表面局部浓度增加引起边界层流体阻力增加，导致传质推动力下降的现象，而膜污染是指料液中的微粒、胶体粒子或溶质分子由于与膜之间存在物理化学作用而在膜表面及膜孔中沉积，使膜孔堵塞或变小，膜阻增大，膜的渗诱率下降的现象。

3 回答440 围观

问有老师跑过BCL-2的蛋白吗，我做的缺血再灌注模型，跑了几次，换了两个抗体，但是跑出来的结果是反的，缺氧组比对照组多，不知道是啥

dxy_ewo205k

可以先做定量，看下mRNA水平的表达

3 回答479 围观

问提取的蛋白有少量沉淀那可以有什么办法补救一下吗？

Eason老歌迷

蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀，建议蛋白浓缩后的最终浓度不要超过20mg/ml。如果已经出现沉淀，可以改进一下实验方法:1、离心力降低为原来的20-50%，2、改用截留分子量更大的超滤膜，3、在浓缩过程中取出超滤管，用枪头反复吹吸几次再继续浓缩，4、体积较大的样品可考虑选用超滤杯，减少沉淀的发生。据我所知，没啥补救

6 回答523 围观

问不同的活化的介质对偶联的配基有不同的要求，有没有什么技巧可以更好的选择到合适的活化介质？

Eason老歌迷

当然是因地制宜，根据不同的需要选择合适的。现在一般要自己合成亲和填料，有很多公司都提供活化好的介质，自己偶联就可以，其中比较常用的有溴化氰琼脂糖凝胶，环氧琼脂糖凝胶，氨基琼脂糖凝胶，羧基琼脂糖凝胶，活化酯琼脂糖凝胶，以及巯基琼脂糖凝胶等，但是如果是小分子的配基最好呢选择有3-10碳作为手臂的活化介质为好，此外也曾经有文献报导固定辅酶时，偶联位置不同，选择性有差别，因此可以选择自己适合的活化介质。

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问Sephadex G-25(medium)柱脱盐时，盐浓度太高对柱效有影响吗?若有，一般对盐浓度限度如何?

Hey裴pei

是有影响的。盐浓度较高的样品在柱子上走的峰要更宽，同时需要的柱子的分辨率也高，建议少上点样品，可以减少因浓度导致的影响。

3 回答572 围观

问请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶?

异乡人hyq

FMN可偶联的有限，FMN的结构上也有个仲胺，可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上。

3 回答455 围观

问蛋白纯化出现沉淀怎么回事？怎么解决呢？

天一湖医者

首先需要确定沉淀的诱因：pH值处于等电点附近、高盐下析出还是样品结构的稳定性，当然还有可能是HCP在作祟？第一种和第二种就比较简单，调整pH值或者盐浓度；第三种情况的话就需要做一些缓冲液的筛选以及添加剂的筛选；HCP的话就考虑增加去除HCP的淋洗工艺

3 回答6076 围观

问目的蛋白先洗脱杂蛋白被吸附怎么办？

一个小哭包

在洗脱缓冲液中加入醇类物质，洗脱过程中不易产生蛋白多聚体，可大幅提高目的蛋白的纯度。

3 回答400 围观

问蛋白质纯化实验过程中，标签包涵体蛋白易洗脱，怎么解决这个问题？

异乡人hyq

原核蛋白表达纯化是很容易形成包涵体的，在现阶段可以采用俩种手段，一是预防，二是复性。预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前，对表达环境进行优化的一些手段，来降低重组蛋白合成的速率。例如：密码子优化，表达温的选择，与分子伴侣或折叠酶共表达等等；而蛋白质的复性则是指：在变性条件不剧烈，变性蛋白质内部结构变化不大回时，除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复其答天然构象和生物活性的方法。

4 回答505 围观

问洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定

一个小哭包

洗脱不同蛋白的最恰当的离子强度液不一定一样，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱

3 回答389 围观

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